刘亚利
- 作品数：10 被引量：9H指数：2
- 供职机构：解放军第153中心医院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 重组人sCR1分子胞外区多克隆抗体的制备
- 目的:原核表达人sCR1分子胞外区及其多克隆抗体制备。方法:提取人总RNA进行RT-PCR扩增合成cDNA,以cDNA为模板,构建重组表达质粒pET28a-sCR1。转化大肠杆菌中,用IPTG诱导表达重组人sCR1融合蛋...
- 王广兰刘亚利宫璀璀初霞
- 关键词：原核表达多克隆抗体补体受体1型
- 文献传递
- 人血清微量sCR1蛋白双抗体夹心ELISA试剂盒的评价与应用
- 2017年
- 目的对研制的人血清微量sCR1蛋白双抗体夹心ELISA试剂盒的重复性、稳定性进行评价,并了解其实际应用效果。方法选取中、晚期肝硬化患者50例和健康体检者50例分别作为肝病组和正常对照组,以鼠抗人CD35单克隆抗体、兔抗人sCR1多克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG为包被抗体、夹心抗体和检测抗体,以纯化后的重组人sCR1蛋白为标准品,建立人血清微量sCR1蛋白双抗体夹心ELISA试剂盒,进行试剂盒重复性和稳定性检验,并应用该试剂盒检测两组血清sCR1蛋白水平。结果双抗体夹心ELISA法检测人血清微量sCR1蛋白的线性范围是15.60~250.00ng/mL;血清sCR1蛋白水平对吸光度值的回归方程为Y=112.10 X2+18.21 X+1.694(r2=0.998);重复性检测中,高、低水平标准品检测值的批内相对标准偏差(RSD)分别为6.20%、7.40%,批间RSD分别为6.70%和7.90%;试剂盒稳定性检测中,RSD均不大于0.01;肝病组血清sCR1表达水平显著高于正常对照组(P<0.01)。结论人血清微量sCR1蛋白双抗体夹心ELISA试剂盒线性范围广、重复性好、易于保存,适合于临床和科研检测工作。
- 孙振威仓宝成刘亚利尚伟王广兰
- 关键词：双抗体夹心法酶联免疫吸附试验
- 人可溶性补体受体1型双抗体夹心ELISA法的建立及初步应用被引量：2
- 2013年
- 目的建立定量检测人血清可溶性补体受体1型(sCR1)双抗体ELISA夹心法。方法用鼠抗人CD35单克隆抗体(mAb)包被反应板,以兔抗人sCR1抗体(PcAb)为夹心抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔IgG为检测抗体,纯化后的人sCR1蛋白为标准品,建立定量检测人血清sCR1双抗体夹心ELISA法,并检测50例体检健康者和32例肝硬化患者血清样本中sCR1水平。结果建立的双抗体夹心ELISA法检测人血清sCR1的线性范围为15.6～250 ng/mL。低、高浓度批内变异系数(CV)分别为9.3%、7.1%;批间CV分别为11.2%和9.82%;回收率分别为89.5%和92.5%。50例健康人和32例肝硬化患者血清sCR1水平分别为(33.82±5.88)ng/mL和(152.99±9.51)ng/mL,两者比较有统计学差异(t=70.18,P<0.001)。结论成功建立了检测人血清sCR1的双抗体夹心ELISA法,重复性和准确性较好。初步发现肝硬化患者血清sCR1水平显著升高。
- 解放军第周明武刘亚利徐立博李琛琪罗彦平陈北方王广兰
- 关键词：酶联免疫吸附试验双抗体夹心法
- 重组sCR1在毕赤酵母细胞中的表达、纯化及鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的:酵母细胞SMD 1168表达人sCR1,并对重组蛋白进行纯化。方法:从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCR1全长cDNA,将其克隆入真核表达载体pPIC9K,构建含人sCR1的重组质粒(pPIC9K-sCR1);经测序鉴定正确后,将重组质粒转化入毕赤酵母菌细胞SMD 1168中,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析及W estern b lot鉴定,并通过N i2+-NTA agarose亲和层析纯化。结果:经甲醇诱导的含pPIC9K-sCR1的酵母细胞表达出重组人sCR1的融合蛋白,48~72 h sCR1融合蛋白表达量最高。此蛋白在凝胶上表现为M r大于31 KDa的蛋白区带,在W estern b lot分析中可被sCR1的CD35单克隆抗体(mAb)识别。经N i2+-NTA agarose亲和层析纯化后得到较纯的sCR1融合蛋白。结论:人sCR1融合蛋白在酵母细胞表达系统中的高水平表达,并且有与人体天然蛋白相同的抗原活性。
- 王广兰宫璀璀王文丽刘亚利刘琰邰苏豫
- 关键词：蛋白表达
- 肝硬化患者创伤后血清微量可溶性补体受体1型表达水平被引量：1
- 2013年
- 补体系统是机体重要的防御系统,正常的补体激活在清除凋亡细胞,参与免疫应答和防御病原体入侵中有重要作用[1].补体系统属于天然免疫系统(innate immune system)的一个组成部分,它的激活可产生多种生物学效应,具有免疫调控、黏附、调理促吞噬、清除免疫复合物(immune complexes,IC)和炎症等作用,都是通过补体受体介导的,如补体系统的过度活化,可造成机体组织损伤等疾病,给身体带来严重危害.
- 周明武仓宝成刘亚利李琛琪刘蕊徐立博罗彦平王广兰
- 兔抗人sCR1抗体制备及临床初步应用被引量：2
- 2010年
- 目的原核表达人sCR1分子胞外区,制备多克隆抗体,建立双抗体夹心ELISA法。方法提取人总RNA进行RT-PCR扩增合成cDNA,以cDNA为模板,构建重组表达质粒pET28a-sCR1,转化大肠埃希菌,用IPTG诱导表达重组人sCR1融合蛋白,以其免疫家兔制备抗血清。经纯化并鉴定特异性后建立双抗体夹心ELISA法检测血清中sCR1水平,探讨其对慢性病毒性肝炎及活动性SLE患者的诊断价值。结果研制的兔抗人sCR1抗体ELISA法效价为125 000,纯度和特异性较好。30例健康献血者血清中sCR1为(39.8±7.9)ng/ml;22例慢性病毒性肝炎患者为(48.5±24.7)ng/ml;9例活动性SLE患者为(36.3±17.6)ng/ml。结论制备的兔抗人sCR1抗体效价及特异性较好,用其建立的双抗体夹心ELISA法有望用于临床血清学的诊断。
- 王广兰刘亚利初霞张长远宫璀璀王文丽高天蓝星
- 关键词：多克隆抗体补体受体1型
- 重组人sCR1真核表达载体的构建、表达及其生物学活性被引量：4
- 2008年
- 目的:采用酵母细胞分泌型载体pPIC9k表达人可溶性补体受体(sCR1),研究重组人sCR1融合蛋白的体外生物学活性。方法:从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCR1全长cDNA,然后将其克隆入毕赤酵母细胞分泌型表达载体pPIC9k中,构建含人sCR1的重组质粒(pPIC9k-sCR1),经测序鉴定正确,电转化入毕赤酵母细胞SMD1168中,将经G418抗性筛选出的重组sCR1酵母细胞株进行PCR鉴定,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,通过Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化后进行生物学活性鉴定。结果:获得毕赤酵母细胞分泌型表达载体pPIC9k-sCR1,经G418筛选及PCR鉴定得到高拷贝整合的重组酵母细胞株,经甲醇诱导含pPIC9k-sCR1的酵母SMD1168细胞表达出重组sCR1融合蛋白。此蛋白在SDS-PAGE上表现为Mr约31000的蛋白区带,在Western blot分析中可被sCR1的CD35单克隆抗体(mAb)识别。经Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化后得到较纯的sCR1融合蛋白及较高的生物学活性。结论:人sCR1融合蛋白在酵母细胞表达系统中的高水平表达,并且有与人体天然蛋白相同的抗原性及其生物学活性。
- 王广兰宫璀璀王文丽张长远刘亚利何培霞郑淑娜陈湘林
- 关键词：生物学活性真核表达载体
- 人sCR1克隆、真核和原核表达纯化及其多克隆抗体制备
- 2008年
- 目的:原核表达人sCR1分子胞外区及其多克隆抗体制备。方法:提取人总RNA进行RT-PCR扩增合成cDNA,以cDNA为模板,构建重组表达质粒pET28 a-sCR1。转化大肠杆菌中,用IPTG诱导表达重组人sCR1融合蛋白,将其作为免疫原制备兔多抗。采用ELISA法检测抗体效价,经免疫亲和层析法纯化后,进行SDS-PAGE鉴定分析。结果:在原核细胞中高效表达人sCR1融合蛋白,经纯化复性后作为免疫原,免疫家兔,获得了高效价及特异性的兔抗人sCR1多克隆抗体,可特异地识别人sCR1蛋白。结论:纯化复性后的sCR1融合蛋白作为抗原免疫家兔,有较好的抗原性和免疫原性,成功地制备出兔抗人sCR1多克隆抗体,为进一步大量表达纯化人sCR1融合蛋白与临床免疫学检测方法的建立,也为深入研究sCR1生物学功能奠定了基础。
- 王广兰宫璀璀刘亚利张长远刘珊王文丽戴启宇
- 关键词：原核表达多克隆抗体补体受体1型
- 系统性红斑狼疮患者血清微量sCR1表达水平及临床意义
- 刘亚利程赵伟伟徐立博王广兰
