张长远
- 作品数：5 被引量：15H指数：2
- 供职机构：解放军第153中心医院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 兔抗人sCR1抗体制备及临床初步应用被引量：2
- 2010年
- 目的原核表达人sCR1分子胞外区,制备多克隆抗体,建立双抗体夹心ELISA法。方法提取人总RNA进行RT-PCR扩增合成cDNA,以cDNA为模板,构建重组表达质粒pET28a-sCR1,转化大肠埃希菌,用IPTG诱导表达重组人sCR1融合蛋白,以其免疫家兔制备抗血清。经纯化并鉴定特异性后建立双抗体夹心ELISA法检测血清中sCR1水平,探讨其对慢性病毒性肝炎及活动性SLE患者的诊断价值。结果研制的兔抗人sCR1抗体ELISA法效价为125 000,纯度和特异性较好。30例健康献血者血清中sCR1为(39.8±7.9)ng/ml;22例慢性病毒性肝炎患者为(48.5±24.7)ng/ml;9例活动性SLE患者为(36.3±17.6)ng/ml。结论制备的兔抗人sCR1抗体效价及特异性较好,用其建立的双抗体夹心ELISA法有望用于临床血清学的诊断。
- 王广兰刘亚利初霞张长远宫璀璀王文丽高天蓝星
- 关键词：多克隆抗体补体受体1型
- 重组人sCR1真核表达载体的构建、表达及其生物学活性被引量：4
- 2008年
- 目的:采用酵母细胞分泌型载体pPIC9k表达人可溶性补体受体(sCR1),研究重组人sCR1融合蛋白的体外生物学活性。方法:从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCR1全长cDNA,然后将其克隆入毕赤酵母细胞分泌型表达载体pPIC9k中,构建含人sCR1的重组质粒(pPIC9k-sCR1),经测序鉴定正确,电转化入毕赤酵母细胞SMD1168中,将经G418抗性筛选出的重组sCR1酵母细胞株进行PCR鉴定,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,通过Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化后进行生物学活性鉴定。结果:获得毕赤酵母细胞分泌型表达载体pPIC9k-sCR1,经G418筛选及PCR鉴定得到高拷贝整合的重组酵母细胞株,经甲醇诱导含pPIC9k-sCR1的酵母SMD1168细胞表达出重组sCR1融合蛋白。此蛋白在SDS-PAGE上表现为Mr约31000的蛋白区带,在Western blot分析中可被sCR1的CD35单克隆抗体(mAb)识别。经Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化后得到较纯的sCR1融合蛋白及较高的生物学活性。结论:人sCR1融合蛋白在酵母细胞表达系统中的高水平表达,并且有与人体天然蛋白相同的抗原性及其生物学活性。
- 王广兰宫璀璀王文丽张长远刘亚利何培霞郑淑娜陈湘林
- 关键词：生物学活性真核表达载体
- 重组人sCR1在巴斯德毕赤酵母细胞中的表达、纯化及鉴定被引量：12
- 2007年
- 目的:酵母细胞SMD1168表达人sCR1,并对重组蛋白进行纯化。方法:从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCR1全长cDNA,将其克隆入真核表达载体pPIC9K,构建含人sCR1的重组质粒(pPIC9K-sCR1);经测序鉴定正确后,将重组质粒转化入毕赤酵母菌细胞SMD1168中,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析及Western blot鉴定,并通过Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化。结果:经甲醇诱导的含pPIC9K-sCR1的酵母细胞表达出重组人sCR1的融合蛋白,48～72hsCR1融合蛋白表达量最高。此蛋白在凝胶上表现为Mr约31000的蛋白区带,在Western blot分析中可被sCR1的CD35单克隆抗体(mAb)识别。经Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化后得到较纯的sCR1融合蛋白。结论:人sCR1融合蛋白在酵母细胞表达系统中的高水平表达,并且有与人体天然蛋白相同的抗原活性。
- 王广兰宫璀璀王文丽张长远王炳南关晓峰王轩李璇
- 关键词：蛋白表达
- 人sCR1克隆、真核和原核表达纯化及其多克隆抗体制备
- 2008年
- 目的:原核表达人sCR1分子胞外区及其多克隆抗体制备。方法:提取人总RNA进行RT-PCR扩增合成cDNA,以cDNA为模板,构建重组表达质粒pET28 a-sCR1。转化大肠杆菌中,用IPTG诱导表达重组人sCR1融合蛋白,将其作为免疫原制备兔多抗。采用ELISA法检测抗体效价,经免疫亲和层析法纯化后,进行SDS-PAGE鉴定分析。结果:在原核细胞中高效表达人sCR1融合蛋白,经纯化复性后作为免疫原,免疫家兔,获得了高效价及特异性的兔抗人sCR1多克隆抗体,可特异地识别人sCR1蛋白。结论:纯化复性后的sCR1融合蛋白作为抗原免疫家兔,有较好的抗原性和免疫原性,成功地制备出兔抗人sCR1多克隆抗体,为进一步大量表达纯化人sCR1融合蛋白与临床免疫学检测方法的建立,也为深入研究sCR1生物学功能奠定了基础。
- 王广兰宫璀璀刘亚利张长远刘珊王文丽戴启宇
- 关键词：原核表达多克隆抗体补体受体1型
