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胡萝卜体细胞胚基因DcLEA1与DcEXGT1的分子克隆及功能鉴定: 胚胎的休眠和萌发是发育生物学研究的重要内容.利用体细胞胚为材料进行有关的研究具有独特的优越性.该论文在黄美娟等人建立的胡萝卜体细胞胚蔗糖调控-解调控培养体系的基础上,对胚胎的休眠-萌发机理进行了深入的探讨.现简要概括如下...; 刘一鸣; 关键词：胡萝卜体细胞胚蔗糖

胡萝卜LEA基因家族新成员DcLEA1的克隆及其结构与表达特性分析被引量：8: 2004年; 利用改进的cDNA代表性差示分析 (RDA)技术 ,从调控状态的胡萝卜体细胞胚中分离到LEA基因片段 ,以该片段为探针筛选调控状态的胡萝卜体细胞胚的cDNA文库及用控渗法构建的基因组文库 ,获得了胡萝卜LEA基因家族的一个新成员DcLEA1(GenBank注册号 :AF30 8739) .该基因转录区由 5′UTR区、两个外显子、一个内含子及 3′UTR构成 ,启动区长 1.2kb ;开放阅读框为 4 80bp ,编码 15 9个氨基酸和一个终止密码子 .Northern杂交分析表明 ,DcLEA1基因在胡萝卜成体中无表达活性 ;在调控状态的胡萝卜体细胞胚中具有高表达活性 ;在解调控 12h的胡萝卜体细胞胚中 ,转录本含量急剧下降 ;随着解调控时间的延长 ,胡萝卜体细胞胚根开始延伸 ,DcLEA1基因的表达活性又有所增加 .这一现象与LEA基因在种子休眠和萌发过程中表达活性的变化规律相似 .由此推测 ,可以利用胡萝卜体细胞胚蔗糖调控解调控体系 ,来模拟种子休眠与萌发的过程 ,研究植物胚根发育相关基因表达调控的分子机理 .; 刘一鸣刁丰秋张雷黄美娟吴乃虎; 关键词：胡萝卜 LEA基因克隆基因表达

cDNA文库的差异筛选与抑制性减数杂交相结合分离胡萝卜体细胞胚根发育相关基因被引量：24: 2002年; 应用cDNA文库差异筛选与抑制性减数杂交相结合的技术程序,并通过反向Northern分析进一步验证,成功地从解调控12 h的胡萝卜体细胞胚的cDNA文库中,分离到7个在解调控12h特异表达的基因.其中4个含有完整的编码框,分别编码木质葡聚糖内转糖基化酶、脂肪酸去饱和酶、一种poly(A)结合蛋白和一种酰基转移酶.另外3个是5＇端部分缺失的cDNA基因片段,分别编码三磷酸甘油醛脱氢酶、一种糖蛋白和一种与单链RNA/DNA结合的蛋白.对其中部分基因的Northern分析结果显示,它们的表达量在蔗糖调控下的胡萝卜体细胞胚根发育的不同时期均有显著变化,说明它们都是与胚根发育相关的基因.; 张雷杨志攀刘一鸣黄美娟吴乃虎; 关键词：CDNA文库基因克隆基因分离基因表达

高质量水稻基因组文库构建的策略和方法被引量：5: 2006年; 采用改良的CTAB法提取水稻基因组DNA,经Sau3AI部分酶切的产物经透析袋电洗脱法回收、正丁醇浓缩后,以1∶1的摩尔数比和载体臂连接.包装后测定,文库滴度达到106 pfu/ml;随机酶切重组克隆显示,插入片段达到预期的15～23 kb之间,提示该方法适于植物材料高质量基因组文库的构建,有利于分离完整的基因序列及其调控区.; 梁卫红刘一鸣吴乃虎; 关键词：基因组DNA 电洗脱滴度

一种构建基因组文库的方法: 本发明提供了一种构建基因组文库的方法，该方法首先制备出原生质体；利用浓度为大于0M小于0.1M的非离子型渗透压调节剂溶液溶涨原生质体，释放出细胞核；将非离子型渗透压调节剂溶液的浓度调整至0.5－0.8M；将细胞核进行洗涤...; 吴乃虎刘一鸣黄美娟; 文献传递

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刘一鸣