王从印
- 作品数：10 被引量：8H指数：2
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- 一种检测HIV‑1 p24抗原的试剂盒及其应用
- 本发明公开了一种检测HIV‑1 p24抗原的试剂盒，包括酶标板、样品稀释液、酶结合物、阴性对照物、阳性对照物、底物液、显色液、终止液以及洗涤液；所述酶标板由鼠抗HIV‑1 p24单克隆包被抗体包被，所述鼠抗HIV‑1 p...
- 王强王从印张红中王惠芬姜少灏苏彦辉房桂珍张剑刘东刚
- 文献传递
- 人IL-15基因工程菌的实验研究
- 目的:获得rhIL-15基因工程菌.方法:从肺癌细胞株A549中提取细胞总RNA、RT-PCR方法扩增出编码人IL-15成熟区基因的片段.该基因片段经限制性内切酶ECORⅠ、XhoⅠ双酶切后,插入融合表达质粒pGEX-4...
- 王从印
- 关键词：IL-15包涵体基因工程菌生物活性
- 文献传递
- 抗人白细胞介素15单克隆抗体的制备及特性鉴定被引量：2
- 2004年
- 目的 :制备鼠抗人白细胞介素 15(hIL 15)单克隆抗体 (mAb) ,并鉴定其特性。方法 :自重组人白细胞介素 15(rhIL 15)基因工程菌中 ,提取融合蛋白GST IL 15,以 12 0g/LSDS PAGE分离鉴定 ,切取含有目的条带的凝胶 ,免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与Sp2 / 0骨髓瘤细胞常规融合 ,依次进行HAT选择培养 ,间接ELISA法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞及克隆化。对杂交瘤细胞株的稳定性及其分泌的mAb的特性进行鉴定。另外 ,以rhIL 15包涵体蛋白 (rhIL 15IBP)免疫新西兰白兔 ,制备抗hIL 15的多克隆抗体 (多抗 )。用抗hIL 15的mAb与多抗建立双抗体夹心间接ELISA。结果 :获得 1株可稳定分泌特异性抗hIL 15mAb的杂交瘤细胞。建立了双抗体夹心间接ELISA ,检测rhIL 15蛋白的敏感性达 10 μg/L。结论 :成功地制备抗hIL 15mAb ,并建立了一种可用于hIL 15检测的双抗体夹心间接ELISA。
- 王平王润田王丽王从印佟慧李全海杨丽娟
- 关键词：包涵体蛋白单克隆抗体ELISA
- 抗HIV-1 p24单克隆抗体的制备、特性鉴定及初步应用被引量：3
- 2006年
- 目的:制备抗HIV1p24单克隆抗体(mAb)及特性鉴定。方法:采用细胞融合技术制备可稳定分泌抗HIV1p24mAb的杂交瘤细胞。选择高效价、识别不同抗原表位的mAb纯化后,分别包被ELISA板及作为酶标记mAb,建立双mAb夹心ELISA法,检测400份正常人血浆,20份抗HIV抗体阳性(p24抗原阴性)的血浆,20份HIV1感染的细胞培养上清及HIV1p24抗原国家参考品,并同时用进口p24抗原检测试剂盒进行对比检测。结果:经细胞融合、筛选、克隆化,共获得10株可分泌高效价mAb的杂交瘤细胞。纯化的腹水mAb经配对试验,选A值≥2.50的2株mAb建立的双mAb夹心ELISA法,敏感性可达2.5ng/L,且与进口试剂盒检测结果的一致性良好。结论:建立了具有高度敏感性和特异性的双mAb夹心ELISA法,为研制可用于检测HIV1p24抗原的试剂盒奠定了基础。
- 张红中王润田王蕙芬张坤娟王从印王丽
- 关键词：HIV-1P24单克隆抗体ELISA
- 一种检测HIV-1 p24抗原的试剂盒及其应用
- 本发明公开了一种检测HIV‑1 p24抗原的试剂盒，包括酶标板、样品稀释液、酶结合物、阴性对照物、阳性对照物、底物液、显色液、终止液以及洗涤液；所述酶标板由鼠抗HIV‑1 p24单克隆包被抗体包被，所述鼠抗HIV‑1 p...
- 王强王从印张红中王惠芬姜少灏苏彦辉房桂珍张剑刘东刚
- 文献传递
- 抗HIV-2 gp36基因工程抗原单克隆抗体的制备和鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的制备稳定产抗人类免疫缺陷病毒-2gp36基因工程抗原单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb,单抗)的杂交瘤细胞株及相应单抗,鉴定细胞株的生物学特性和单抗的免疫学特性及理化特性;初步探索用所制单抗构建检测gp36酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)的适用性。方法分别用杂交瘤技术和常规免疫制备抗gp36的单抗和多抗(polyclonal antibody,PcAb,多抗)。纯化单抗和多抗,并标记辣根过氧化物酶。分别用纯化的单个单抗-单个单抗或单个单抗-多抗建立夹心ELISA。结果获得9株稳定分泌抗gp36单抗的杂交瘤细胞株。用纯化的8E5单抗和辣根过氧化物酶标记的多抗建立的夹心ELISA可以检测到低至50μg/L的gp36。结论为人类免疫缺陷病毒-2感染的检测和研究初步提供了可资应用的单抗。
- 赵正历王润田王平王从印张征峥邓郁青
- 关键词：HIV-2抗体单克隆酶联免疫吸附测定
- 抗HIV-1 gp41单克隆抗体的制备及意义
- 2009年
- 目的为HIV-1感染的检测和研究提供依据。方法以基因工程重组抗原HIV-1 gp41蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备抗gp41蛋白的单克隆抗体(mAb),用ELISA法鉴定所得mAb的Ig亚类、效价及特异性。单抗经饱和硫酸铵(SAS)纯化和HRP标记后,利用双抗体夹心ELISA筛选检测gp41蛋白的最佳配伍单抗,分别包被ELISA板及作为酶标mAb,建立双mAb夹心ELISA法。结果经细胞融合、筛选、克隆化,获得了12株可分泌高效价mAb的杂交瘤细胞。纯化的腹水mAb经配对试验,选出2株mAb:7D4和9G2-HRP建立了双mAb夹心ELISA法,检测HIV-1 gp41抗原的灵敏度是1μg/L。结论获得12株效价高的抗HIV-1 gp41的mAb,建立了特异性强、灵敏度较高的检测HIV-1 gp41抗原的双抗体夹心ELISA法。
- 邓郁青张坤娟王从印张征峥宋小天张红中王润田
- 关键词：人类免疫缺陷病毒-1单克隆抗体双抗体夹心ELISA
- 三种多糖对抗人红细胞A、B抗原单克隆抗体稳定性的影响
- 2010年
- 目的研究葡萄糖、蔗糖、麦芽糖三种多糖对抗人红细胞A、B抗原单克隆抗体(简称单抗)稳定性的影响,进一步延长血型试剂的使用期限。方法将葡萄糖、蔗糖、麦芽糖作为稳定剂,计为葡萄糖组、蔗糖组、麦芽糖组,生理盐水做对照(盐水组),分别加入抗人红细胞A、B抗原的腹水型单抗溶液,37℃、室温、4℃条件下观察抗体效价变化。结果 0.1～0.8 mol/L的葡萄糖、蔗糖、麦芽糖对抗A、B单抗效价均有一定稳定作用,同种糖高浓度的稳定效果优于低浓度,最佳有效稳定浓度为0.4 mol/L。葡萄糖、蔗糖、麦芽糖作为稳定剂存在时,37℃下腹水单抗的效价稳定性可延长至2～3周,室温下可延长至4～6个月,4℃下可延长至24个月。结论葡萄糖、蔗糖、麦芽糖均可作为单抗的稳定剂,可提高抗体的稳定性,延长使用期限;蔗糖效果更好。
- 张坤娟邓郁青弋国红张红中王从印张雪迎王惠芬
- 关键词：单克隆抗体稳定性蔗糖麦芽糖
- 抗HIV-1 P24单克隆抗体纯化方法的研究被引量：1
- 2011年
- 目的建立从小鼠腹水中纯化抗人重组HIV-1 P24单克隆抗体的方法。方法含抗P24单克隆抗体的腹水经离心、过滤及缓冲液变换等处理后,先经盐析处理,去除杂蛋白。再经DEAE sepharose CL-6B、protein G亲和层析柱进一步纯化。结果经纯化后获得的抗P24单克隆抗体,其生物学活性、抗体效价保持良好,纯度达到96.1%,抗体回收率达63.3%。结论建立的单克隆抗体纯化方法简便,高效,所得的单克隆抗体纯度高,生物学活性好。
- 王从印张红中史希媛苏彦辉王惠芬
- 关键词：获得性免疫缺陷综合征小鼠
- rhIL-15表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2002年
- 目的 获得rhIL 15基因工程菌。方法 从肺癌细胞株A549中提取细胞总RNA ,用RT PCR法扩增编码人IL 15成熟区基因的片段。经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后 ,插入融合表达质粒pGEX 4T 2的相应酶切位点 ,构建重组融合蛋白表达质粒 ,并转化感受态大肠杆菌BL2 1而得到工程菌。结果 重组质粒插入片段核酸序列测定的结果 ,与文献报道的IL 15蛋白成熟区的核酸序列相一致。该工程菌所表达的融合蛋白多数以包涵体的形式存在 ,占菌体蛋白总量的 39%。复性后 ,纯化的rhIL 15蛋白经MTT比色法初步测定 ,具有促进CTLL 2细胞增殖的能力。结论 获得了具有生物学活性的rhIL
- 王从印王润田陈良葛锡锐
- 关键词：基因重组包涵体大肠杆菌
