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程帝: 作品数：12 被引量：15H指数：3; 供职机构：中山大学孙逸仙纪念医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金深圳市科技计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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DNA甲基转移酶1对胆管癌细胞中端粒酶的调控作用: 2012年; 目的观察丙型肝炎病毒核心蛋白（HCVc）阳性肝内胆管癌细胞中人端粒酶逆转录酶（hTERT）的表达，并探讨DNA甲基转移酶1（DNMTl）对hTERT表达的影响。方法将HCVc质粒瞬转入肝内胆管癌细胞株RBE，5-氮杂-2’-脱氧胞嘧啶核苷（AZA）处理转染后细胞；Westernblot法及逆转录．聚合酶链反应（RT．PCR）检测细胞中hTERT及DNMTl的mRNA及蛋白表达。结果比较空白对照组，转染HCVc质粒后，RBE细胞株中hTERT及DNMTl的mRNA、蛋白水平分别上调3．457±0．081、1．684±0．020、1．826±0．060、2．513±0．119（P〈0．05）；AZA处理转染后细胞可逆转hTERT的升高，mRNA和蛋白水平分别下调2．755±0．098、1．491±0．045（P〈0．05）。结论DNMTl参与HCVc诱导的hTERT表达上调过程。; 程帝郭宁周嘉嘉廖巧芳陈汝福李志花; 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白 DNA甲基转移酶端粒酶

丙型肝炎病毒核心蛋白对胆管癌细胞NFAT1基因表达的影响被引量：5: 2012年; 目的探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV C)是否通过调控转录因子NFAT1的表达参与肝内胆管癌的发展及恶性生物学行为。方法构建表达HCV C核心蛋白的真核表达质粒pEGFP-N3-HCV C,通过瞬时转染pEGFP-N3-HCV C质粒,RT-PCR检测肝内胆管癌RBE细胞中NFAT1 mRNA的表达情况,Western blot检测NFAT1蛋白的表达情况,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期变化情况。结果转染HCV C后胆管癌细胞NFAT1基因的mRNA及蛋白表达明显上升,差异具有显著性(P<0.05);HCV C能够促进细胞向G2/M期进展及使细胞增殖能力增加。结论 HCV C可上调胆管癌细胞中NFAT1基因的表达,促进细胞周期进展及胆管癌细胞增殖,可能与肝内胆管癌的发展有关。; 廖巧芳李志花陈汝福郭宁曾兵程帝郑礼平; 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白细胞周期细胞增殖

长链非编码RNALnc-DQ在肝癌组织中的表达及其对SMMC7721细胞干性特征的影响: 2017年; 目的检测长链非编码RNA Lnc-DQ在肝癌组织中的表达,探讨其对肝癌SMMC7721细胞干性特征的影响。方法采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-q PCR)检测Lnc-DQ在30例肝癌组织和癌旁组织中的表达;sh RNA干扰下调Lnc-DQ在SMMC7721细胞中的表达,克隆形成和成球培养实验观察其对SMMC7721肿瘤干细胞特征的影响;流式细胞仪检测CD133+细胞亚群的比例。结果 Lnc-DQ在肝癌组织中的相对表达显著高于癌旁组织(3.24±0.34 vs1.81±0.17),差异具有统计学意义(P<0.05)。sh RNA转染可显著下调Lnc-DQ在SMMC7721细胞中的表达(P<0.05)。实验组细胞(sh-Lnc-DQ)克隆形成数为43.62±5.35,较对照组(sh-NC)显著减少(94.31±5.07),差异具有统计学意义(P<0.05)。成球培养实验显示sh-Lnc-DQ可显著抑制SMMC7721细胞的成球能力(P<0.05)。实验组细胞CD133+细胞比例显著低于对照组织(2.32%±0.25%vs 9.24%±0.69%),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Lnc-DQ在肝癌中高表达,下调Lnc-DQ的表达能够抑制肝癌SMMC7721细胞的干性功能。; 林泽伟曾兵叶会霖程帝刘吉奎; 关键词：长链非编码RNA 肝癌

丙型肝炎病毒核心蛋白通过活化stat3通路促进肝癌细胞上皮间质转化的研究被引量：2: 2015年; 目的探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCVc)对肝癌细胞信号转导子和转录激活子3(stat3)通路及上皮间质转化(EMT)的影响。方法将含HCVc基因序列的重组质粒p EGFP-N3-HCVc转染人肝癌细胞Hep G2,Real-Time PCR和Western blotting检测HCVc、总stat3、磷酸化stat3(p-stat3)及EMT指标蛋白E-cadherin、Vimentin、Snail的表达,划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况。结果划痕实验及Transwell实验结果显示,过表达HCVc可增强Hep G2细胞的迁移和侵袭能力;stat3通路抑制剂AG490处理可抑制Hep G2细胞的侵袭能力。RT-PCR和Western blotting结果显示,过表达HCVc后,Hep G2细胞中p-stat3、Vimentin及Snail在表达升高,E-cadherin表达下降;AG490处理可下调p-stat3、Vimentin及Snail表达,增强E-cadherin表达。结论 HCVc可活化stat3通路促进肝癌细胞上皮间质转化,增强肝癌细胞的迁移和侵袭能力。; 周嘉嘉陈汝福邓小耿高文超郑上游程帝周泉波张杰; 关键词：病毒核心蛋白质类肝炎丙型 STAT3 上皮间质转化

沉默NANOG基因表达对侧群表型肝癌干细胞化疗耐药的影响: 2018年; 目的观察沉默NANOG基因对侧群表型肝癌干细胞化疗耐药的影响,初步探讨提高肝癌化疗效果的新方法。方法基于侧群(SP)细胞分选法,采用流式细胞术从肝癌细胞Hep3B中分选SP细胞和非侧群(NSP)细胞,通过特异性靶向NANOG基因的si RNA沉默SP细胞中NANOG基因表达,MTT法检测SP细胞对化疗药物阿霉素(DOX)的敏感性,实时荧光定量PCR(real-time PCR)和免疫印迹(Western blotting)检测NANOG和耐药相关基因ABCB1的表达。结果 (1)肝癌细胞Hep3B中分选的SP细胞比例为(13.3±1.8)%。(2)MTT法结果显示DOX处理后SP细胞存活率为(65.3±5.4)%,NSP细胞存活率为(41.2±4.7)%;SP细胞对DOX的耐药性高于NSP细胞(P<0.05)。(3)NANOG和ABCB1 m RNA在SP细胞中的表达水平分别是NSP细胞的4.5、4.0倍;NANOG和ABCB1蛋白在SP细胞中表达水平分别是NSP细胞的4.2、3.6倍,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)RNAi沉默NANOG表达后,si NANOG组SP细胞NANOG、ABCB1的m RNA和蛋白表达水平均较Mock组和si NC组明显下降(P<0.05),SP细胞对阿霉素DOX的耐药性显著降低(P<0.05)。结论 NANOG基因在维持SP表型肝癌干细胞耐药性起重要作用,沉默NANOG表达后SP细胞耐药性受到抑制,可能与ABCB1表达下调有关。; 周嘉嘉程帝陈汝福邓小耿邓君阁叶会霖韦禄胜张斌; 关键词：肿瘤干细胞 NANOG ABCB1

肝癌HepG2细胞来源外泌体通过环磷酸腺苷反应元件结合蛋白／叉状头／翅膀状螺旋转录因子3调控调节性T细胞的机制被引量：2: 2018年; 目的探讨肝癌HepG2细胞来源外泌体是否通过环磷酸腺苷（cAMP）反应元件结合蛋白／叉状头／翅膀状螺旋转录因子3（CREB／Foxp3）途径调控调节性T细胞（Treg细胞）。方法超速离心法分离外泌体（Exsomes）；透射电镜及Westernblot对外泌体进行鉴定；将HepG2和L02细胞来源外泌体分别与人外周血单个核细胞共培养，流式细胞检测Treg细胞比例的变化，Westernblot检测CREB／Foxp3信号蛋白的表达。结果见外泌体直径约30-100nm，呈圆形或椭圆形的囊泡状结构，且富含CD81和CD63蛋白。与L02-exo组[（1．87±0．18）％]和空白对照组[（1．43±0．12）％]比较，HepG2-exo组[（6．87±0．87）％]Treg细胞的比例显著上调，P值分别为0．005和0．004。HepG2-exo组CREB磷酸化分别是对照组和L02-exo组的1．74倍和1．63倍，P值均为0．001；HepG2．exo组Foxp3磷酸化分别是对照组和L02-exo组的1．93倍和1．78倍，P值均为0．001。结论肝癌细胞HepG2来源的外泌体可能通过CREB／Foxp3信号上调Treg细胞比例参与肿瘤免疫逃逸。; 林泽伟程帝叶会霖张光涛刘吉奎曾兵; 关键词：外泌体调节性T细胞环磷酸腺苷反应元件结合蛋白肝癌

上调SMYD3对人胆管癌FRH0201细胞中DNMT3B表达及细胞增殖的影响被引量：1: 2012年; 目的:研究人胆管癌细胞株FRH0201中SET和MYND结构域含有蛋白3(SET and MYND domain-containing protein 3,SMYD3)过度表达对DNA甲基化转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)表达及细胞增殖能力的影响。方法:瞬时转染SMYD3真核表达质粒后,RT-PCR检测细胞中DNMT3B mRNA水平的变化;Western blotting检测细胞中DNMT3B蛋白水平的变化;CCK-8检测细胞增殖能力的改变;流式细胞术检测细胞周期的改变。结果:以未处理组为对照,胆管癌细胞FRH0201在转染pEGFP-C3-SMYD3质粒后,DNMT3B蛋白及mRNA表达均显著上升(P<0.01);细胞的增殖能力显著提高、细胞增殖速度加快(P<0.05);进入G_2/M期的细胞明显增多(P<0.05)。结论:过度表达SMYD3,可引起细胞中DNMT3B的表达上调并增强细胞增殖能力。; 程帝李志花陈汝福郭宁廖巧芳郑礼平周泉波周嘉嘉; 关键词：甲基化

DNA甲基转移酶在肿瘤发生预后治疗中的作用: 2010年; DNA甲基转移酶（DNMT）在多种肿瘤细胞中呈表达上调，异常表达的DNMT通过催化肿瘤抑制基因启动子区域CpG岛甲基化，引起抑癌基因甲基化失活，从而促进正常细胞向肿瘤细胞转化。研究表明，DNMT在消化道肿瘤、乳腺癌、肺癌等肿瘤细胞中呈表达丰度异常，且与肿瘤的发生呈明显相关性，并影响肿瘤预后。药物及靶向干扰可抑制DNMT的活性，可使甲基化的基因去甲基化复活，进而抑制肿瘤细胞生长，促进细胞凋亡。; 程帝陈汝福; 关键词：DNA甲基化肿瘤

SET-及MYND-结构域含有蛋白3真核表达载体的构建及对肝门部胆管癌细胞生物学行为的影响被引量：1: 2012年; 目的构建SET-及MYND-结构域含有蛋白3（SMYD3）荧光质粒并观察组蛋白甲基转移酶SMYD3对肝门部胆管癌细胞生物学行为的影响。方法在人源组织中调取并扩增SMYD3基因酶切并连接于pEGFP—C3质粒构建SMYD3荧光质粒pEGFP—C3-SMYD3。利用质粒转染人肝门部胆管癌细胞株FRH0201并检测SMYD3表达改变，利用细胞计数试剂盒（CCK-8）方法及Transwell方法检测过表达SMYD3后细胞生长及迁移能力变化。结果酶切及测序结果显示SMYD3成功连接入pEGFP—C3载体中，Westernblot法结果显示在质粒转染组中SMYD3表达较未转染组升高（73．23±5．60）％，较未转染组及空质粒转染组SMYD3表达水平差异有统计学意义（P〈0．05）；CCK-8方法及Transwell方法显示转染组细胞生长速度较未转染组及空白组加快，迁移能力增强，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论SMYD3的过表达促进肝门部胆管癌细胞的增殖及迁移，可能是调控肝门部胆管癌发生发展的因素之一。; 郭宁陈汝福周泉波林青程帝曾兵周嘉嘉李志花; 关键词：组蛋白甲基转移酶肝门部胆管癌

丙型肝炎病毒核心蛋白对肝癌细胞stat3通路及细胞周期蛋白cyclin D1的调控作用被引量：3: 2013年; 【目的】探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCVc)是否调控肝癌细胞中stat3通路及细胞周期蛋白cyclin D 1的表达,参与肝癌细胞的恶性生物学行为。【方法】将含HCVc基因的真核表达质粒pEGFP-N3-HCVc瞬时转染人肝癌细胞HepG2使HCVc过表达,用siRNA-HCVc敲除HepG2细胞中HCVc的表达,荧光显微镜检测绿色荧光蛋白(GFP)的表达,Western blot检测HCVc、总stat3(stat3)、磷酸化stat3(p-stat3)及cyclin D1蛋白的表达;流式细胞术及MTT法检测细胞周期变化及细胞增殖情况。【结果】Western blot结果显示,通过瞬时转染而过表达HCVc的HepG2细胞中,HCVc、p-stat3及cyclin D1的蛋白水平高于空白质粒转染组和未转染组;siRNA-HCVc敲除HCVc表达后,HCVc、p-stat3和cyclin D1蛋白的表达下调;酪氨酸磷酸化抑制剂AG490(JAK2特异性拮抗剂)处理可下调过表达HCVc的HepG2细胞中p-stat3和cyclin D1蛋白的表达。流式细胞术显示过表达HCVc可促进细胞向G 2/M期进展。MTT法结果显示过表达HCVc使HepG2细胞增殖能力增加。【结论】HCVc可活化HepG2细胞中stat3通路,调控细胞周期蛋白cyclin D1的表达,促进细胞周期进展及细胞增殖,可能与肝癌的发展有关。; 唐晶周嘉嘉邓小耿程帝张杰伍耀豪曾乐祥邱荣林陈汝福; 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白肝癌 STAT3 CYCLIN D1

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