何明亮
- 作品数：20 被引量：29H指数：3
- 供职机构：中山大学孙逸仙纪念医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- 环状RNA-circ-VCAN在胶质瘤细胞中功能及作用机制研究被引量：1
- 2017年
- 目的探索环状RNA-circ-VCAN在胶质瘤中功能及作用机制。方法荧光定量PCR验证环状RNA-circ-VCAN在正常胶质细胞以及胶质瘤细胞中的表达情况;核质分离实验验证circ-VCAN在细胞核质分布情况;RNase R消化线性RNA实验验证circ-VCAN对RNase R消化的抵抗能力;构建敲低环状RNA-circ-VCAN的U373和T98G瞬时转染细胞株;CCK8实验检测敲低环状RNA-circ-VCAN后细胞的增殖能力;Western blot检测NF-κB通路蛋白P-P65表达水平。结果与正常胶质细胞(HA1800)相比,环状RNA-circ-VCAN在胶质瘤细胞(尤其是在U373和T98G)中高表达,差异均有统计学意义(P<0.05);细胞核质分离实验证明circ-VCAN主要存在细胞质中;circ-VCAN能抵抗RNase R的消化;CCK8实验证明敲低circ-VCAN能抑制U373和T98G的细胞增殖(P<0.05);Westernblot检测敲低circ-VCAN后的U373和T98G细胞显示NF-κB通路蛋白P-P65表达水平减少。结论在胶质瘤细胞中敲低circ-VCAN能减慢胶质瘤细胞的生长,提示circ-VCAN可能成为一个新的治疗靶点。
- 黄佐於谢琳欧阳乐平何明亮刘家豪刘安民
- 关键词：胶质瘤
- MiR-125a-3p通过MAPK信号通路影响胶质瘤细胞的增殖及凋亡的实验研究被引量：6
- 2018年
- 目的 探讨miR-125a-3p对胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响及其在丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中的作用.方法 (1)比较肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中565例胶质瘤组织和10例正常脑组织中miR-125a-3p的表达.(2)收集中山大学孙逸仙纪念医院神经外科自2015年4月至2018年4月手术切除并经病理检查证实的胶质瘤标本30例,其中低级别脑胶质瘤7例,高级别胶质瘤23例.另外收集同期因手术入路需要和颅脑外伤切除的正常脑组织标本8例.应用反转录-实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测脑胶质瘤组织和正常脑组织中miR-125a-3p的表达.(3)体外培养正常胶质细胞HA1800及人脑胶质瘤细胞U251、U373、U87、U138、T98G,72 h后应用RT-qPCR检测6组细胞miR-125a-3p的表达;(4)取对数生长期的U251、U373细胞,分为无义序列组和miR-125a-3p模拟物组,应用LipofectamineTM 2000分别转染无义序列和miR-125a-3p模拟物.转染后72 h应用RT-qPCR检测2组细胞miR-125a-3p的表达,克隆形成实验检测2组细胞的增殖情况,流式细胞术检测2组细胞的凋亡情况,Western blotting检测2组细胞凋亡相关蛋白和MAPK信号通路相关蛋白的表达.结果 (1)TCGA数据库中,胶质瘤组织中miR-125a-3p的表达低于正常脑组织,差异有统计学意义(P<0.05).(2)临床收集的正常脑组织、低级别胶质瘤、高级别胶质瘤标本中miR-125a-3p的表达依次降低,差异有统计学意义(P<0.05);(3)与HA1800细胞比较,U251、U373、U87、U138、T98G细胞中miR-125a-3p的表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05),其中U251和U373细胞中miR-125a-3p表达下降得最明显.(4)与无义序列组比较,miR-125a-3p模拟物组U251和U373细胞中miR-125a-3p的表达增加,克隆形成率降低,凋亡率增加,凋亡相关蛋白活化的半胱氨酸蛋白酶(cleaved-caspase)-3、cleaved-caspase-9和cleaved-caspase-7的表达均增加,磷酸化(p)-P38/MAPK蛋白的表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miR-125a-3p在脑�
- 谢琳黄佐於欧阳乐平何明亮刘家豪刘安民
- 关键词：神经胶质瘤细胞增殖丝裂原活化蛋白激酶
- siRNA沉默MAG促进脑出血后大鼠运动功能的改善
- 2014年
- 目的:研究慢病毒介导的siRNA沉默髓鞘相关糖蛋白(MAG)对脑出血后脱髓鞘再生和神经功能恢复的影响。方法:SD大鼠45只,随机分为3组:模型+siRNA组、模型+PBS组和正常对照组,每组15只。胶原酶诱导建立脑出血模型,据不同组别于模型术后1 d立体定向下进行侧脑室注射携带MAG基因siRNA的慢病毒和PBS。分别于治疗前1 d和治疗后1、7、14、21 d用Rotarod运功功能评分检测大鼠神经功能情况,应用劳克坚牢蓝(luxol fast blue)检测脑损伤区的神经纤维恢复情况,利用免疫组化和Western blotting检测MAG的表达变化。结果:Rotarod评分检测脑出血模型大鼠术后的运动功能,模型+siRNA组的神经功能改善和神经纤维修复较模型+PBS组明显提高(P<0.05),劳克坚牢蓝染色示siRNA组较PBS组的神经纤维损害范围缩小,siRNA组的MAG蛋白的表达较PBS组明显下降(P<0.05)。结论:siRNA沉默MAG后明显提高神经纤维髓鞘再生能力,促进脑出血后神经功能缺失的修复。
- 刘安民罗铭蔡望青陈舒何明亮潘伟生
- 关键词：RNA干扰髓鞘再生脑出血
- 一期双侧颞叶病灶切除术治疗双侧严重放射性颞叶损伤的临床疗效分析
- 2020年
- 目的探讨一期双侧颞叶病灶切除术治疗鼻咽癌放疗后双侧严重放射性额叶损伤的疗效及安全性。方法中山大学孙逸仙纪念医院神经外科自2013年1月至2017年12月采用一期双侧额叶病灶切除术治疗鼻咽癌放疗后双侧严重放射性颞叶损伤患者12例,回顾性分析患者的临床资料,比较患者术前、术后2周Kamofsky功能状态评分(KPS)变化,记录手术相关并发症和死亡情况,比较患者术前、术后3个月头颅影像学图像以评估额叶病灶变化。结果12例(100%)患者术后KPS评分均得到改善,与术前KPS评分比较差异有统计学意义(P<0.05)。2例患者术后出现肺部感染,1例患者出现切口愈合不良,1例患者出现颅内感染,对症处理后均康复出院。12例患者术后均无新发神经系统症状。随访期间12例患者术后头颅MRI检査显示病灶被完整切除,脑白质病变减轻或完全消退。结论一期双侧颞叶病灶切除术治疗鼻咽癌放疗后双侧严重放射性颞叶损伤是安全可行的。
- 欧阳乐平刘家豪何明亮谢琳黄佐於刘安民
- 关键词：放射性脑损伤疗效
- 脑胶质瘤细胞通过上调树突状细胞TSP-1水平抑制其成熟被引量：1
- 2020年
- 目的探究脑胶质瘤细胞对树突状细胞(DCs)活化成熟的影响及其相关机制。方法诱导培养DCs过程中加入胶质瘤细胞培养上清(TCM),RNA测序分析筛选出差异基因,通过Western blot实验和流式细胞分析检测不同处理下的DCs中TSP-1的表达水平和成熟度,通过ELISA法检测DCs所分泌的不同细胞因子的浓度。结果RNA测序分析发现凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)基因的表达在TCM处理组DCs中较其在阴性对照组DCs中升高。Western blot结果表明,加入TCM或转染过表达质粒,DCs表达TSP-1增加,同时流式细胞分析和ELISA结果证明,其成熟度降低,分泌的细胞因子由Th1型(IL-12p70和TNF-α)向Th2型(IL-10)方向漂移;而利用siRNA进行敲低后,DCs表达TSP-1减少,成熟度升高,分泌的细胞因子也向Th1型方向漂移。结论脑胶质瘤细胞通过上调DCs中TSP-1的表达,抑制DCs的成熟,使其分泌的细胞因子向免疫抑制型因子的方向漂移。
- 陈兴胜何明亮刘安民
- 关键词：胶质瘤树突状细胞凝血酶敏感蛋白1肿瘤微环境
- 二氯醋酸钠提高胶质母细胞瘤U251细胞的放疗敏感性
- 2015年
- 目的:探讨二氯醋酸钠(sodium dichloroacetate acid,DCA)预处理对胶质母细胞瘤U251细胞的放疗敏感性的影响,并研究其可能机制。方法:将U251细胞随机分4个实验组:空白对照(control)组、DCA组、高能X射线照射未经DCA预处理组(IR组)和高能X射线照射经DCA预处理组(DIR组)。用MTT法检测细胞的存活率,DHE染色检测细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平,Western blot检测细胞内Bcl-2的表达变化,流式细胞术检测凋亡细胞百分比。结果:DCA组和control组相比细胞存活率无明显改变,IR组和DIR组较control组细胞存活率明显降低(P<0.05),并且DIR组细胞存活率较IR组明显降低(P<0.05);DIR组ROS阳性细胞百分数较IR组明显升高(P<0.05);DIR组细胞内Bcl-2表达水平较IR组明显降低(P<0.05)。DIR组凋亡细胞百分比较IR组明显升高(P<0.05)。结论:DCA预处理提高了U251细胞对放疗的敏感性,取得了更好的抗肿瘤作用,具体机制可能与提高细胞内ROS含量从而降低Bcl-2蛋白的表达有关。
- 罗铭陈舒薛卫平刘宜敏何明亮刘安民
- 关键词：二氯醋酸钠U251细胞放疗敏感性活性氧簇
- Circ-ZEB1对胶质瘤细胞生物学特性的影响
- 2019年
- 目的探讨circ-ZEB1对胶质瘤细胞增殖、侵袭以及迁移的影响。方法分别在30例胶质瘤组织和8例正常脑组织(均来源于中山大学孙逸仙纪念医院神经外科)、胶质瘤细胞株(A172和U251)以及正常胶质细胞株(HA1800)中采用实时荧光定量PCR法检测circ-ZEB1的表达。采用si-circ-ZEB1转染A172和U251细胞以敲低circ-ZEB1。按照si-circ-ZEB1的种类分为si-1组和si-2组(分别转染si-circ-ZEB1-1、si-circ-ZEB1-2),并设立对照组(siRNA-NC阴性组,转染siRNA-NC)。以CCK-8法检测circ-ZEB1对胶质瘤细胞增殖的影响。分别采用划痕实验和Transwell实验观察circ-ZEB1对胶质瘤细胞迁移和侵袭的影响。应用CircNet数据库分析评价circ-ZEB1的circRNA-miRNA的基因调控网络,以双荧光素酶报告基因实验验证circRNA-miRNA的基因调控网络中circ-ZEB1/miR-140-3p的互作关系。结果Circ-ZEB1在胶质瘤组织中的表达高于正常脑组织(12.16±1.31对比6.84±0.56,P=0.001);相对于低级别胶质瘤[世界卫生组织(WHO)分级为Ⅰ~Ⅱ级],高级别胶质瘤(WHO分级为Ⅲ~Ⅳ级)组织中的circ-ZEB1表达更高(13.77±3.27对比7.50±1.82,P=0.001);且A172和U251的circ-ZEB1相对于HA1800的表达水平分别为2.91±0.30和3.32±0.20(均P<0.01)。CCK-8实验结果表明,与对照组相比,si-1组和si-2组的生长均明显受到抑制,A172细胞的增殖能力分别降低了40.0%和57.1%(均P<0.01),U251细胞的增殖能力分别降低了35.3%和48.5%(均P<0.01)。划痕实验中,si-1组和si-2组的迁移能力较对照组均明显受到抑制(均P<0.05);Transwell实验结果显示,si-1组和si-2组细胞的侵袭能力均低于对照组(均P<0.01)。CircRNA-miRNA的基因调控网络检测结果显示,circ-ZEB1可与多种miRNA相互作用,调节其表达并影响其下游蛋白的功能。双荧光素酶报告基因实验结果提示,circRNA-miRNA的基因调控网络中circ-ZEB1/miR-140-3p存在互作关系。结论Circ-ZEB1在胶质瘤组织和细胞株中呈高表达,下调circ-ZEB1�
- 谢琳黄佐於何明亮李凯舒欧阳乐平刘安民
- 关键词：神经胶质瘤
- 法舒地尔对C17.2小鼠神经干细胞增殖分化的影响及机制研究被引量：1
- 2015年
- 目的 观察法舒地尔对C17.2小鼠神经干细胞增殖与分化的影响并初步探讨其可能机制. 方法 体外常规培养C17.2细胞,分别加入5、25、50、100 μmol/L法舒地尔作用24h,空白对照组加入等量培养基,噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测细胞坏死率的变化;Western blotting检测100 μmol/L法舒地尔组和空白对照组C17.2细胞巢蛋白（nestin）、神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、双皮质素（DCX）、微管相关蛋白-2（MAP-2）的表达以及Notch信号通路中Notch1、Hes 1蛋白的表达,免疫荧光染色检测C17.2细胞内nestin和GFAP阳性细胞的表达. 结果 与空白对照组比较,50、100 μmol/L法舒地尔组细胞存活率明显降低,且100 μmol/L 法舒地尔组细胞存活率低于50 μmol/L法舒地尔组,差异有统计学意义（P＜0.05）.LDH检测结果显示5组细胞坏死率差异无统计学意义（P＞0.05）.Western blotting检测显示,与空白对照组比较,100μmol/L法舒地尔组细胞nestin表达降低,GFAP、DCX、MAP-2表达增高,Notch信号通路中Notch 1、Hes 1蛋白的表达降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.免疫荧光染色显示,与空白对照组比较,100μmol/L法舒地尔组nestin阳性细胞百分比较少,GFAP阳性细胞百分比增加,差异有统计学意义（P＜0.05）. 结论 法舒地尔通过降低Notch信号的表达来抑制C17.2小鼠神经干细胞的增殖,并促使其向神经元和胶质细胞分化.
- 陈舒罗铭刘安民何明亮陈美惠皮荣标
- 关键词：法舒地尔NOTCH信号通路细胞增殖细胞分化
- 血红素氧化酶Ⅰ型蛋白在胶质瘤中的表达及其临床意义被引量：1
- 2017年
- 目的研究血红索氧化酶Ⅰ型（HO-1）在胶质瘤组织中的表达及意义。方法（1）选择中山大学孙逸仙纪念医院神经外科自2010年1月至2015年1月采用手术治疗的胶质瘤患者56例。其中WHO分级Ⅰ级4例，Ⅱ级16例，Ⅲ级10例，Ⅳ级26例。将Ⅰ、Ⅱ级胶质瘤分为低级别胶质瘤组，将Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤分为高级别胶质瘤组。免疫组化染色检测胶质瘤中HO-1的表达。（2）采用R语言survival工具包分析癌症基金组图谱（TCGA）数据库中1107例胶质瘤患者的预后与HO-1蛋白表达的关系。结果（1）免疫组化染色结果显示高级别胶质瘤中HO-1高表达率（75％）高于低级别胶质瘤（30％），差异有统计学意义（P〈0．05）。高级别胶质瘤中HO-1的表达水平高于低级别胶质瘤．差异有统计学意（P〈0．05）。用HO-1评分绘制ROC曲线，曲线下面积为0．747（P=0．002），说明HO-1的表达水平对胶质瘤分级的判断有参考价值。Log-rank检验显示HO-1低表达组患者的累积生存率高于HO-1高表达组，差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）TCGA数据库中HO-1低表达组患者的同期生存率高于HO-1高表达组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论胶质瘤中H0-1蛋白表达水平与胶质瘤恶性程度及预后相关，有望作为反映胶质瘤诊断及治疗的新生物学指标，并成为胶质瘤治疗和研究的新靶点。
- 欧阳乐平李凯舒刘家豪何明亮蔡望青邓跃飞刘安民
- 关键词：神经胶质瘤恶性程度预后
- IDH1突变在胶质瘤发生发展及改善预后中的作用被引量：3
- 2015年
- 胶质瘤是最常见的颅内原发性肿瘤．起源于神经胶质细胞，占神经上皮肿瘤约60％，具有发病率、复发率、死亡率高和治愈率低的“三高一低”的特点。目前临床治疗方式主要还是手术切除、术后辅以放化疗。虽然最近20年对于胶质瘤的研究取得了长足的进展，但治疗效果仍不甚理想。随着肿瘤分子生物学的研究进展，个体化的基因与分子靶向性治疗越来越受到重视。
- 何明亮李凯舒刘安民
- 关键词：神经胶质瘤预后
