张秉强
- 作品数：81 被引量：319H指数：8
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家杰出青年科学基金国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 凋亡抑制因子survivin基因的克隆及在真核细胞中的表达
- 2004年
- 目的 :克隆Survivin编码序列并在真核细胞中表达。方法 :RT -PCR扩增Survivin编码序列 ,建立与绿色荧光蛋白(GFP)共表达的融合重组质粒 ,转染哺乳动物细胞 ,利用GFP绿色荧光和WesternBlot检测Survivin蛋白的表达。结果 :RT -PCR扩增出 4 2 1bp的Survivin编码序列 ,构建融合重组质粒pEGFP -C1-Survivin ,利用GFP荧光和WesternBlot证实Sur vivin蛋白的表达。结论 :成功克隆Survivin基因并在真核细胞中表达。
- 闫歌蒲丹唐霓张秉强高小玲宋文鑫何通川黄爱龙
- 关键词：SURVIVIN绿色荧光蛋白真核细胞
- Dnmt1基因对胃癌细胞株AGS细胞增殖凋亡的影响
- 2006年
- 目的:利用RNA干扰(RNAi)技术,以Dnmt1(DNAmethyltransferase1)为靶基因,设计构建重组体pshRNA-Dnmt1,研究其对胃癌AGS细胞增殖凋亡的影响.方法:设计shRNA的寡核苷酸片断,再克隆至载体pTZU6+1中构建重组体pshRNA-Dnmt1,转染胃癌细胞株AGS,用WesternBlot检测DNMT1蛋白水平变化,用RT-PCR法评估mRNA水平,MTT法动态监测活细胞数,AO/EB法、电镜和TUNEL观察其促凋亡作用.结果:成功构建重组质粒pshRNA-Dnmt1后,进行序列分析得到确证.RT-PCR检测结果证实:重组质粒pshRNA-Dnmt1对胃癌AGS细胞中Dnmt1基因的转录有着明显抑制作用,转染后24h抑制率在21.63%左右;48h为52.97%;72h为72.06%.WesternBlot检测结果表明:pshR-NA-Dnmt1转染AGS细胞后24h出现DNMT1蛋白表达量减少,抑制率为28.24%;48h为68.54%;72h为81.47%.MTT结果提示:转染后24,48和72h细胞数存活率为对照组的79.49%,51.63%和39.16%.AO/EB法、电镜和TUNEL都看见大量典型的凋亡和坏死细胞,转染后48h的细胞凋亡率由对照组的5%上升为35%左右.结论:重组质粒pshRNA-Dnmt1能特异有效地抑制胃癌细胞株AGS内Dnmt1基因的表达,能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,从而为肿瘤的基因治疗开辟了新途径.
- 陈道荣王丕龙杨雪琴黄爱龙张秉强陶小红
- 关键词：DNMT1基因RNA细胞周期
- 短发夹状RNA抑制survivin基因在肝癌细胞中的表达被引量：21
- 2003年
- 目的 构建抗凋亡因子survivin的短发夹状RNA(shRNA),观察其在肝癌细胞株HepG2、SMMC—7721中对survivin基因表达的抑制作用。方法 设计、合成两对survivin编码基因的反向重复序列,中间分别间隔4和8个nt,分别定向克隆至载体pTZU6+1的U6转录启动子下,构建pshRNA—survivin 1和pshRNA—survivin 2重组质粒,与表达survivin基因的质粒pEGFP—C1-survivin共转染肝癌细胞株HepG2和SMMC—7721,荧光显微镜下观察融合蛋白中GFP的表达以分析pshRNA—survivin对survivin基因表达的抑制作用。结果 酶切分析和测序证实pshRNA—survivin 1和pshRNA—survivin 2构建成功;两组shRNA对survivin的表达均有明显的抑制作用,抑制率达80％以上;两重组质粒在HepG2和SMMC—7721两种细胞中抑制目的基因的作用无明显差异;反向重复序列中间隔4或8个nt构建的shRNA,对抑制目的基因的表达无显著差异。结论 构建的pshRNA—survivin重组质粒能有效抑制survivin基因在肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721中的表达。
- 闫歌黄爱龙唐霓张秉强蒲丹向明确兰英华吴刚
- 关键词：短发夹状RNASURVIVIN基因肝癌癌细胞基因治疗
- 活化白细胞黏附分子过表达对肝癌HepG2细胞体内外生物特性的影响被引量：1
- 2018年
- 目的:探讨活化白细胞黏附分子(activated leukocyte cell adhesion molecule,ALCAM)基因过表达对人肝癌细胞HepG2增殖和侵袭的影响。方法:采用腺病毒感染的方法将携带有ALCAM基因的重组腺病毒Ad-ALCAM和腺病毒空载体Ad-null分别转入人肝癌细胞株HepG2中。蛋白质印迹法检测ALCAM蛋白的表达水平,CCK-8法和FCM法分别检测细胞的活力和凋亡率,Transwell小室法检测细胞的迁移和侵袭能力。建立HepG2细胞小鼠移植瘤模型,分别瘤内注射重组腺病毒Ad-ALCAM-siRNA以及Ad-ALCAM,观察ALCAM基因沉默或过表达对移植瘤生长影响;同时采用免疫组织化学法检测移植瘤组织中ALCAM蛋白表达情况及微血管密度(microvessel density,MVD)(以CD34作为抗原标志物)。结果:与空白对照组和Ad-null组相比,Ad-ALCAM组HepG2细胞中ALCAM蛋白的表达水平上调(P<0.01),细胞活力增强,而凋亡率、迁移和侵袭能力下降(P值均<0.05)。在小鼠移植瘤模型中,Ad-ALCAM组与空白对照组和Ad-ALCAM-siRNA组相比肿瘤生长最快,肿瘤组织中ALCAM蛋白表达量和MVD数量均有增加;ALCAM-siRNA组与空白对照组相比肿瘤的生长速度减缓,移植瘤组织中ALCAM蛋白的表达量和MVD数量均减少(P值均<0.05)。结论:ALCAM可能调控了肝癌细胞的增殖和侵袭能力,提示其有望成为诊断肝癌和评估预后的标志,以及治疗肝癌的潜在生物靶点。
- 王南萍王逸云钟立唐也余师师张秉强
- 关键词：活化白细胞黏附分子细胞运动
- 经颈静脉肝内门体分流术后肝性脑病诊治进展被引量：7
- 2016年
- 经颈静脉肝内门体静脉分流术（TIPS）已成为肝硬化门静脉高压并发症治疗的一项重要微创介入技术，该技术目前多应用于肝硬化伴有食管胃底静脉曲张破裂出血（EVB）、顽固性腹水、肝性胸水和Budd-Chiari综合征等病症。TIPS一方面能有效降低门静脉压力，减少EVB、顽固性腹水的危险，但同时导致肝灌注血流减少，加重肝功能的损害和导致门体分流性脑病。为预防TIPS术后肝性脑病的发生，需全面评估其相关影响因素。TIPS术后肝性脑病的诊治仍是目前面临的一大挑战，现主要从其诊治方面作一综述，以提高人们对该病的认识。
- 杨金凤张秉强
- 关键词：肝硬化肝性脑病门静脉经颈静脉肝内门体静脉分流术
- 重组冠状病毒核衣壳蛋白血清抗体检测被引量：5
- 2004年
- 目的 SARS冠状病毒的核衣壳 (Nucleocapsid)蛋白 (N蛋白 )是病毒的主要结构抗原 ,重组N蛋白可用作抗原检测患者血清中相应抗体。方法 以纯化的目的蛋白N 1,N 2分别包被 96孔板 ,检测正常人群及患者血清中抗SARS病毒抗体。结果 检测SARS感染患者血清 ,N 1阳性检出率为 5 5 .6 8% ,N 2阳性检出率为 5 6 .82 % ,与华大基因试剂盒相比符合率分别为 90 .12 %和 87.6 5 %。结论 重组核衣壳蛋白可做为检测SARS抗体的抗原蛋白。
- 蒲丹闫歌张秉强宋文鑫高小玲唐霓王丕龙郑建黄爱龙闫惠平檀玉芬
- 关键词：SARS核衣壳蛋白ELISA抗体
- 应用RNA干扰技术抑制乙型肝炎病毒抗原表达的实验研究被引量：60
- 2003年
- 目的 构建针对乙型肝炎病毒 (HBV)核心区的siRNA表达载体pSIHBV/C ,观察其对HBV复制和表达的影响。方法 将构建成功的 pSIHBV/C与 1 3倍HBV真核表达质粒pHBV1 3共转染HepG2细胞 ,转染后 2 4、4 8、72h ,用Abbott试剂检测细胞上清中HBsAg和HBeAg ,并用免疫荧光染色法观察细胞内病毒核心抗原和表面抗原的表达。结果 成功构建了针对HBV核心区的siRNA表达载体 pSIHBV/C ,并发现它能明显抑制HBsAg和HBeAg的分泌 ,转染后第 2天抑制率达高峰 ,分别为 92 %、85 % ,而随机序列的siRNA无此作用。免疫荧光染色结果也证实转染 2 4h后 ,随pSIHBV/C比例的升高 ,其对HBV抗原表达的抑制作用也随之增加 ,当pSIRNA/C与 pHBV1 3比例为 1∶2 0时 ,pSIHBV/C对细胞内HBsAg和HBcAg表达的抑制作用最强。 结论 乙型肝炎病毒核心区的siRNA具有显著和特异的抗HBV复制和表达的作用。
- 唐霓黄爱龙张秉强闫歌Tong-Chuan He
- 关键词：RNA干扰技术乙型肝炎病毒抗原慢性乙型肝炎
- 短发夹状双链RNA抑制丙型肝炎病毒IRES介导的基因表达被引量：1
- 2006年
- 目的研究载体表达的短发夹状双链RNA(shRNA)对丙型肝炎病毒(HCV)IRES介导的基因表达的特异性抑制作用。方法构建HCV IRES调控的绿色荧光蛋白表达载体(pIRES-GFP)和虫荧光素酶表达载体(p5’ UTR-Luc),以及针对HCV IRES的shRNA表达载体(pshRNA-HCV),共转染HepG2细胞,于转染后24、48,72 h 观察绿色荧光的强弱,用Western blot检测绿色荧光蛋白的表达,半定量逆转录聚合酶链反应法检测GFP的mRNA水平,双荧光素酶系统检测虫荧光素酶活性。结果pshRNA-HCV作用组绿色荧光强度明显弱于未干扰组,GFP蛋白表达量及虫荧光素酶活性降低60％-70％,半定量逆转录聚合酶链反应显示pshRNA-HCV导致了GFP基因mRNA水平的降低。结论针对HCV IRES的shRNA能够显著和特异地抑制该区域调控的蛋白表达水平及mRNA水平,该研究结果为利用RNA干扰技术治疗HCV感染进行了初步探索。
- 陈维贤单林娜陈娟张祯祯张秉强黄爱龙
- 关键词：RNA干扰基因治疗
- 46例妊娠中晚期合并急性胰腺炎的临床特点及预后分析被引量：4
- 2020年
- 目的探讨妊娠中晚期急性胰腺炎的临床特点、实验室检查、影像学检查及预后分析。方法回顾性分析重庆医科大学附属第一医院消化内科2015年8月至2019年3月收治的46例妊娠中晚期合并急性胰腺炎患者的临床资料。结果妊娠晚期妊娠合并急性胰腺炎(APIP)发病率(86.4%)较妊娠中期(54.5%)明显升高(P<0.05)。孕晚期APIP患者人数较孕中期明显增多(P<0.05),上腹部CT显示胰腺水肿程度大于b级的孕晚期APIP患者人数较孕中期明显增多(P<0.05)。总体预后分析发现,不管是孕中期还是孕晚期APIP患者,其预后差异并无统计学意义(P>0.05)。孕中期APIP合并高脂血症的患者引产率(60.0%)较非高脂血症患者(13.3%)高(P<0.05);而孕晚期APIP合并高脂血症患者引产率(58.8%)与非高脂血症患者(28.6%)比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论与妊娠中期比较,妊娠晚期更容易患高脂血症,且中-重型APIP发病率更高,妊娠中晚期妇女应控制高脂饮食摄入,同时加强三酰甘油、胆固醇等水平的检测。
- 顾志勇朱丹张秉强高青
- 关键词：妊娠急性胰腺炎高脂血症
- 急性非静脉曲张上消化道出血的内镜治疗被引量：20
- 2016年
- 内镜作为临床上急性非静脉曲张上消化道出血(acute non-variceal upper gastrointestinal bleeding,ANVU-GIB)治疗的首选,在不同条件下选择的方法存在差异,其中内镜喷洒主要用于弥漫性渗血、静脉出血等疾病,常作为其他内镜治疗的辅助治疗方法;内镜注射常用于大面积渗血、活动性出血难以明确的病变;内镜凝固治疗常用于活动性渗血、注射治疗难以止血的病变;钛夹及套扎器械止血广泛适用于各种出血病灶;联合治疗可有效提高止血率及再出血率。本文旨在为临床医师及时准确选择内镜止血方法提供依据。
- 苟菊花张秉强
- 关键词：急性非静脉曲张上消化道出血
