张君
- 作品数：43 被引量：101H指数：6
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 靶向mdr1基因转录小发夹RNA重组质粒的构建和序列分析
- 2005年
- 目的 构建针对多药耐药基因(mdrl)编码区的发夹状RNA重组质粒载体pshRNA-mdrl,并行序列分析,为下一步逆转肿瘤的多药耐药性打下基础。方法 设计含19-21bp mdrl编码基因片段及中间以4个bp间隔的反向重复序列,经退火形成互补双链,克隆至转录载体pTZU6+1上,转化JM109茵株,提取重组质粒酶切鉴定并序列分析。结果 将合成的DNA片段成功克隆至载体上,经酶切及序列鉴定为目的序列。结论 靶向mdrl基因发夹状RNA干扰重组质粒的成功构建,可进一步研究其对mdrl mRNA转录的抑制,达到逆转肿瘤的多药耐药性的目的。
- 王萍玲胡丽娜张君黄爱龙
- 关键词：重组质粒靶向MDR1基因多药耐药性酶切
- 乙型肝炎病毒PreS1基因的原核表达及免疫学性质鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的构建含乙型肝炎病毒(HBV)PreS1基因的原核表达载体,获得高纯度、有生物活性的PreS1重组蛋白。方法采用PCR法扩增PreS1及其N末端和C末端部分基因序列,克隆入原核表达载体pGST-MOLUC。重组质粒经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE电泳分析和Western blot检测。用谷胱甘肽-Sepharose 4B凝胶亲和层析纯化的重组融合蛋白免疫新西兰家兔,制备GST-PreS1融合蛋白的抗血清。进一步用ELISA分析融合蛋白特异抑制HBV病毒与抗体结合的能力。结果重组质粒转化宿主菌后成功诱导出Mr39000、31000和32000的GST-PreS1、GST-PreS1N及GST-PreS1C融合蛋白,均与预期相对分子质量相符。Western blot检测获得特异的杂交条带。采用谷胱甘肽-Sepharose 4B凝胶纯化的融合蛋白纯度约为90%左右。融合蛋白免疫家兔后抗体滴度达到10-7。病毒捕获ELISA实验表明,融合蛋白能特异抑制病毒与家兔免疫血清结合。结论GST-PreS1融合蛋白能够在大肠杆菌中高效表达,其纯化产物是研究PreS1基因在HBV感染过程中作用的有用工具。
- 张君慕生枝陈维贤黄英黄爱龙唐霓
- 关键词：乙型肝炎病毒原核表达
- RNA干扰沉默mdrl基因联合阿霉素对卵巢癌耐药细胞株SKOV_3/ADM增殖的抑制作用被引量：11
- 2005年
- 目的:观察RNA干扰沉默mdrl基因后化疗药物对卵巢癌耐药细胞株SKOV3 /ADM增殖的影响。方法:RT -PCR检测靶向于mdrl基因的小发夹状RNA(pshRNA -mdrl)对SKOV3 /ADM细胞内mdr1mRNA表达的影响;采用MTT法及软琼脂克隆形成实验测定pshRNA -mdrl联合化疗药物阿霉素对SKOV3 /ADM的增殖抑制作用。结果:pshRNA -mdrl能抑制SKOV3 /ADM细胞mdr1mRNA的表达,pshRNA -mdr1联合阿霉素明显抑制SKOV3 /ADM细胞的增殖。结论:靶向于mdr1的pshRNA联合阿霉素能显著抑制SKOV3 /ADM的增殖。
- 王萍玲胡丽娜邓凯贤张君宋文鑫
- 关键词：卵巢癌耐药RNAIMDRL基因
- 抗O139群霍乱弧菌单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定被引量：11
- 2006年
- 目的制备抗O139群霍乱弧菌(vibriocholeraeO139)的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性,为进一步研制检测O139群霍乱弧菌的胶体金免疫试纸条创造条件。方法以灭活的O139群霍乱弧菌免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗O139群霍乱弧菌的mAb。采用间接ELISA方法和Westernblot对mAb的特异性进行鉴定。采用间接ELISA法鉴定mAb的Ig亚类、检测其腹水效价及相对亲和力,并进行表位分析。结果获得2株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞(O4D7和O4D10),其Ig亚类分别为IgG2b和IgG3;腹水mAb的效价均为1∶107;mAbO4D7的相对亲和力在1×105以上,O4D10在1×104以上。ELISA相加实验的结果显示,2株mAb可识别不同的抗原表位。结论成功地制备抗O139群霍乱弧菌的两株mAb,为建立快速特异检测O139群霍乱弧菌感染的试验方法提供了有力的工具。
- 张君张娟唐霓张秉强陈维贤黄爱龙郑建
- 关键词：O139群霍乱弧菌单克隆抗体生物学特性
- 抗2型登革病毒M蛋白单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的克隆表达2型登革病毒M蛋白,用纯化的重组蛋白免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术制备可用于胶体金快速检测试条的抗2型登革病毒M蛋白的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法利用登革热2型病毒全长基因重组质粒,经PCR方法扩增出prm/m基因片段,在pET-32a(+)表达系统中表达,表达产物用Ni柱亲和层析纯化后,用于免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗M蛋白的mAb,采用间接ELISA方法和Western blot进行mAb特异性鉴定;同时采用间接ELISA方法鉴定mAb相对亲和力。结果获得2株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞Ⅲ1A6和Ⅲ3D2;相对亲和力均在105以上。Western blot显示2株mAb能特异识别重组M蛋白。结论成功地制备出抗登革病毒2型病毒M蛋白的2株mAb,为建立快速特异检测登革病毒的实验方法提供了有力的工具。
- 张娟但妍张君蔡雪飞陈婧郑建黄爱龙
- 关键词：登革病毒M蛋白单克隆抗体生物学特性
- 用T7噬菌体展示技术筛选HCV核心蛋白的相互作用蛋白被引量：6
- 2007年
- 目的用T7噬菌体筛选系统筛选HCV核心蛋白的相互作用蛋白。方法应用T7噬菌体展示技术,以通过原核表达的方式得到HCV的核心蛋白作为靶分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行筛选,对筛选到的克隆进行DNA序列分析及同源性搜索。结果经鉴定得到1个阳性克隆,确定了能与HCV核心蛋白相互作用的蛋白为:Smad interacting-protein 1(SIP1)。结论T7噬菌体展示筛选系统是筛选相互作用蛋白的一种简单、快速和有效的手段,筛选到的相互作用蛋白为进一步探讨核心蛋白的致病、致癌机制提供重要依据。
- 黄英蔡雪飞张君黄爱龙
- 关键词：HCV核心蛋白相互作用蛋白
- 艰难梭状芽孢杆菌谷氨酸脱氢酶的原核表达、纯化及其酶活性被引量：1
- 2013年
- 目的原核表达艰难梭状芽孢杆菌(Clostridium difficile,CD)谷氨酸脱氢酶(Glutamate dehydrogenase,GDH),纯化重组蛋白,并检测其酶活性。方法采用PCR法从标准株ATCC BAA-1805中扩增GDH基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28-GDH,转化感受态大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经SDS-PAGE和Western blot分析,并通过Ni-NAT层析柱分离纯化后,根据脱氢酶酶活测定方法,测定纯化蛋白的酶活性。结果重组表达质粒pET-28-GDH经双酶切及测序,证实构建正确,重组蛋白的相对分子质量约46 000,可与抗His单抗特异性结合,主要以可溶性形式表达。纯化的目的蛋白纯度可达90%,浓度为1.7 mg/ml。纯化蛋白GDH以NADPH和NADP为辅酶,酶活性分别为42.6和63.3 U/L。结论已成功在大肠杆菌中表达了重组CD GDH,纯化的目的蛋白纯度高,具有GDH酶活性,为制备GDH单克隆抗体奠定了基础。
- 杜茜吴志鹃蔡雪飞袁作为张君郑建
- 关键词：谷氨酸脱氢酶基因表达纯化酶活性
- 抗CP4-EPSPS单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定被引量：8
- 2007年
- 目的制备可用于胶体金快速检测试条的抗CP4-EPSPS(5-enolpyruvlshimimate-3-phosphate synthase)单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法以重组蛋白CP4-EPSPS免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗CP4-EPSPS的mAb,以间接ELISA法和Western blot进行mAb特异性鉴定;同时采用间接ELISA法鉴定mAb的Ig亚类,检测mAb的效价及相对亲和力,并进行mAb结合表位分析。结果获得2株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞(Ⅲ5A3,Ⅲ13A2)。其抗体亚类均为IgG1;腹水效价分别为1∶106和1∶108;相对亲和力Ⅲ5A3在105以上,Ⅲ13A2在106以上。ELISA相加实验结果显示2株mAb识别相同或相近的抗原表位。结论成功地制备出抗CP4-EPSPS的2株mAb,为建立快速特异检测转基因植物(GMO)的实验方法提供了有力的工具。
- 敬凌霞蔡雪飞慕生枝刘湘张君唐霓郑建黄爱龙
- 关键词：单克隆抗体生物学特性GMO
- 抑制Dicer基因对shRNA功能发挥的影响
- 2006年
- 本文将Dicer基因的RNA酶III结构域作为靶区,设计并构建了两个抗Dicer基因的小发夹样RNA(shRNA)表达载体,将其转染2215、结肠癌TC细胞和基因组中整合有绿色荧光蛋白基因(GFP)的HepG2A9细胞,通过RT-PCR评价RNA干扰抑制Dicer基因表达的效率;当HepG2A9细胞Dicer基因表达被上述RNA干扰抑制时,再转染抗GFP的shRNA表达载体,通过RT-PCR和荧光显微镜观察GFP表达水平。结果显示,在不同细胞系中,这两个抗Dicer基因shRNA表达载体,均能明显抑制Dicer基因的表达;当Dicer基因受抑时,后续转染抗GFP的shRNA表达载体不能有效抑制GFP的表达。结果表明,抗Dicer基因shRNA表达载体,能够明显抑制Dicer基因的表达;shRNA表达载体的功能发挥需要Dicer酶的直接参与。
- 张秉强陈维贤黄英何茂锐吴莹张君Tong-Chuan He黄爱龙
- 关键词：RNA干扰DICER
- HepG2细胞膜上乙型肝炎病毒前S1蛋白(preS1)结合蛋白的研究被引量：4
- 2009年
- 采用pull down技术研究preS1在HepG2细胞膜上的结合蛋白。以原核表达的GST-preS1融合蛋白为探针蛋白,与生物素标记的HepG2细胞裂解液进行pull down试验分离与preS1结合的膜蛋白。Western blot结果显示HepG2细胞膜上有一大小约110kDa蛋白(p110)与preS1结合。通过对比实验证明该蛋白具有较好的组织特异性和种属特异性。研究结果显示该蛋白是HepG2细胞膜上与preS1结合的蛋白,可能与HBV的早期感染过程有关。
- 丁岗强张君杨凤杨键向光明唐霓黄爱龙
- 关键词：乙型肝炎病毒前S1蛋白结合蛋白PULL
