陈舒
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 供职机构：中山大学孙逸仙纪念医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 靶向MAG基因shRNA慢病毒载体的构建及其对MAG基因表达的沉默被引量：4
- 2013年
- 目的:设计以MAG基因为靶点的短发夹状RNA(shRNA),构建重组慢病毒载体并鉴定此RNA干扰体系对MAG基因表达的影响。方法:将3条靶向大鼠MAG基因的shRNA片段插入至慢病毒载体pWPI,与pCDNA3-MAG-FLAG质粒用Lipofectamine 2000共转染293T细胞,Western blotting法鉴定出最有效的shRNA。此重组质粒与pAX2和pMD2G经293T细胞包装后,产生的重组慢病毒感染少突胶质细胞,48 h后Western blotting法检测MAG蛋白的表达情况。结果:经双酶切后测序鉴定,构建了MAG shRNA慢病毒载体pWPI-MAG,鉴定出shRNA-2为最为有效的shRNA。重组慢病毒能明显抑制少突胶质细胞中MAG的表达。结论:慢病毒介导的shRNA干扰技术可特异性阻断MAG的表达,为进一步探讨MAG特异性shRNA治疗神经系统髓鞘损伤奠定了基础。
- 陈舒罗铭蔡望青李方成何志威刘安民
- 关键词：短发夹状RNA慢病毒
- 法舒地尔对C17.2小鼠神经干细胞增殖分化的影响及机制研究被引量：1
- 2015年
- 目的 观察法舒地尔对C17.2小鼠神经干细胞增殖与分化的影响并初步探讨其可能机制. 方法 体外常规培养C17.2细胞,分别加入5、25、50、100 μmol/L法舒地尔作用24h,空白对照组加入等量培养基,噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测细胞坏死率的变化;Western blotting检测100 μmol/L法舒地尔组和空白对照组C17.2细胞巢蛋白（nestin）、神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、双皮质素（DCX）、微管相关蛋白-2（MAP-2）的表达以及Notch信号通路中Notch1、Hes 1蛋白的表达,免疫荧光染色检测C17.2细胞内nestin和GFAP阳性细胞的表达. 结果 与空白对照组比较,50、100 μmol/L法舒地尔组细胞存活率明显降低,且100 μmol/L 法舒地尔组细胞存活率低于50 μmol/L法舒地尔组,差异有统计学意义（P＜0.05）.LDH检测结果显示5组细胞坏死率差异无统计学意义（P＞0.05）.Western blotting检测显示,与空白对照组比较,100μmol/L法舒地尔组细胞nestin表达降低,GFAP、DCX、MAP-2表达增高,Notch信号通路中Notch 1、Hes 1蛋白的表达降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.免疫荧光染色显示,与空白对照组比较,100μmol/L法舒地尔组nestin阳性细胞百分比较少,GFAP阳性细胞百分比增加,差异有统计学意义（P＜0.05）. 结论 法舒地尔通过降低Notch信号的表达来抑制C17.2小鼠神经干细胞的增殖,并促使其向神经元和胶质细胞分化.
- 陈舒罗铭刘安民何明亮陈美惠皮荣标
- 关键词：法舒地尔NOTCH信号通路细胞增殖细胞分化
- siRNA沉默MAG基因对脑出血大鼠的神经保护作用
- 2014年
- 目的探讨慢病毒介导的siRNA沉默MAG基因对脑出血大鼠的神经保护作用。方法将SD大鼠45只随机分为3组:siRNA组、PBS组和正常对照组,每组15只。胶原酶诱导建立脑出血模型,据不同组别于模型术后1 d立体定向下进行侧脑室注射慢病毒MAG基因的siRNA和PBS。分别于治疗前1 d和治疗后1、7、14、21 d利用Rotarod运功功能评分检测大鼠神经功能情况,用弥散张力成像技术检测大鼠的FA参数,应用劳克坚牢蓝检测脑损伤区的神经纤维恢复情况。结果 siRNA组的神经功能改善和神经纤维修复较PBS组明显提高(P<0.05),siRNA组的rFA值较PBS组明显升高(P<0.05),劳克坚牢蓝染色结果显示,在血肿周围组织siRNA组较PBS组的神经纤维损害范围缩小。结论 siRNA沉默MAG后较明显提高神经纤维髓鞘再生能力,rFA对脑出血后神经功能恢复的评估有重要意义。
- 刘安民林笑丰刘庆余胡震陈舒
- 关键词：髓鞘再生脑出血
- 二氯醋酸钠提高胶质母细胞瘤U251细胞的放疗敏感性
- 2015年
- 目的:探讨二氯醋酸钠(sodium dichloroacetate acid,DCA)预处理对胶质母细胞瘤U251细胞的放疗敏感性的影响,并研究其可能机制。方法:将U251细胞随机分4个实验组:空白对照(control)组、DCA组、高能X射线照射未经DCA预处理组(IR组)和高能X射线照射经DCA预处理组(DIR组)。用MTT法检测细胞的存活率,DHE染色检测细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平,Western blot检测细胞内Bcl-2的表达变化,流式细胞术检测凋亡细胞百分比。结果:DCA组和control组相比细胞存活率无明显改变,IR组和DIR组较control组细胞存活率明显降低(P<0.05),并且DIR组细胞存活率较IR组明显降低(P<0.05);DIR组ROS阳性细胞百分数较IR组明显升高(P<0.05);DIR组细胞内Bcl-2表达水平较IR组明显降低(P<0.05)。DIR组凋亡细胞百分比较IR组明显升高(P<0.05)。结论:DCA预处理提高了U251细胞对放疗的敏感性,取得了更好的抗肿瘤作用,具体机制可能与提高细胞内ROS含量从而降低Bcl-2蛋白的表达有关。
- 罗铭陈舒薛卫平刘宜敏何明亮刘安民
- 关键词：二氯醋酸钠U251细胞放疗敏感性活性氧簇
- 法舒地尔联合谷氨酸降低胶质瘤细胞存活率被引量：2
- 2014年
- 目的观察Rho激酶抑制剂法舒地尔对胶质瘤细胞NMDAR-1表达和联合谷氨酸降低细胞存活率。方法使用法舒地尔干预原代人脑胶质瘤细胞48h后再加入谷氨酸共同培养细胞24h。相差显微镜观察法舒地尔对细胞形态变化的影响;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的存活率;免疫荧光和蛋白质印迹检测谷氨酸受体的表达变化。结果经过法舒地尔干预48h后,免疫荧光(NMDAR-1阳性细胞百分比计数:空白对照组18.9%±3.7%,Fas100μmol/L组79.4%±6.4%,P<0.05)和蛋白质印迹表明谷氨酸受体的表达明显升高(Fas50μmol/L组相对密度:Blank组4.07±1.04倍,P<0.05,Fas100μmol/L组为4.89±0.96倍,P<0.05),谷氨酸能明显降低经法舒地尔处理后的细胞的存活率(空白对照组与空白对照+谷氨酸组吸光度分别为1.47±0.11和1.34±0.20,P>0.05;Fas50μmol/L组和Fas50μmol/L+谷氨酸组为0.98±0.16和0.66±0.15,P<0.05;Fas100μmol/L组和Fas100μmol/L+谷氨酸组为0.89±0.13和0.49±0.17,P<0.05)。结论法舒地尔可以诱导人脑胶质瘤细胞谷氨酸受体的表达增高,从而可以联合谷氨酸发挥谷氨酸兴奋性毒性达到更好的抗胶质瘤的作用。
- 陈舒罗铭蔡望青何明亮陈美惠刘安民
- 关键词：法舒地尔胶质瘤谷氨酸
- siRNA沉默MAG促进脑出血后大鼠运动功能的改善
- 2014年
- 目的:研究慢病毒介导的siRNA沉默髓鞘相关糖蛋白(MAG)对脑出血后脱髓鞘再生和神经功能恢复的影响。方法:SD大鼠45只,随机分为3组:模型+siRNA组、模型+PBS组和正常对照组,每组15只。胶原酶诱导建立脑出血模型,据不同组别于模型术后1 d立体定向下进行侧脑室注射携带MAG基因siRNA的慢病毒和PBS。分别于治疗前1 d和治疗后1、7、14、21 d用Rotarod运功功能评分检测大鼠神经功能情况,应用劳克坚牢蓝(luxol fast blue)检测脑损伤区的神经纤维恢复情况,利用免疫组化和Western blotting检测MAG的表达变化。结果:Rotarod评分检测脑出血模型大鼠术后的运动功能,模型+siRNA组的神经功能改善和神经纤维修复较模型+PBS组明显提高(P<0.05),劳克坚牢蓝染色示siRNA组较PBS组的神经纤维损害范围缩小,siRNA组的MAG蛋白的表达较PBS组明显下降(P<0.05)。结论:siRNA沉默MAG后明显提高神经纤维髓鞘再生能力,促进脑出血后神经功能缺失的修复。
- 刘安民罗铭蔡望青陈舒何明亮潘伟生
- 关键词：RNA干扰髓鞘再生脑出血
