张巨峰
- 作品数：12 被引量：15H指数：2
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- CYP1A1基因MspI酶切位点多态性与慢性重度牙周炎易感性的关系
- 2006年
- 目的:研究内蒙古地区汉族非吸烟人群和吸烟人群中,细胞色素P4501A1(cytochrome P4501A1,CYP1A1)基因MspⅠ酶切位点多态性与慢性重度牙周炎(chronic Severe periodontitis,CP)易感性的关系。方法:对50例CP患者和51例正常对照者按吸烟情况进行分组,用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP),检测研究人群中CYP1A1基因3’端MspⅠ酶切位点的3种基因型(A,B,C)的分布频率。结果:不考虑吸烟情况下,MspⅠ基因型C在病例组和对照组中各占20％和13．7％,基因型A在两组中分别占42％和47．1％,基因型B在两组中分别占38％和39．2％,各基因型在两组间比较差异无显著性(P>0．05)。但在吸烟组Mspl C型者患慢性重度牙周炎的危险性(OR)是其他基因型的5倍(95％可信限:1．342 18．62)。结论:MsplC型可能是吸烟者慢性重度牙周炎易感性的遗传标志。
- 张巨峰周立社秦文斌雎天林彭志平
- 关键词：细胞色素P4501A1基因多态性
- 肿瘤细胞表面柯萨奇病毒-腺病毒受体与5型腺病毒感染效率的关系被引量：3
- 2006年
- 目的:探讨不同肿瘤细胞系柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)和整合素的表达水平与5型腺病毒感染效率的关系,为腺病毒基因治疗研究奠定基础。方法:利用瞬时转染CAR的真核表达质粒提高肿瘤细胞表面CAR的表达,应用抗体封闭细胞表面的CAR和整合素后,通过流式细胞仪和荧光素酶分析法测定腺病毒Ad5-CMV-EGFP和Ad5-CMV-Luc对肿瘤细胞的感染效率和基因表达水平的变化。结果:不同肿瘤细胞表面CAR和整合素的表达水平是不同的,其中SMMC-7721和A549细胞CAR的表达量最高,而K562细胞CAR的表达水平最低;荧光显微镜和流式细胞仪检测Ad5-CMV-EGFP对肿瘤细胞的感染效率,结果显示5型腺病毒对于SMMC-7721和A549细胞的感染效率最高,而对于K562细胞则很低;瞬时转染表达CAR的真核质粒可提高多种肿瘤细胞表面CAR的表达,较大幅度提高了5型腺病毒的感染效率。而抗体封闭肿瘤细胞表面的CAR或整合素后,腺病毒感染效率显著下降。结论:肿瘤细胞表面CAR和整合素的表达水平决定了腺病毒对肿瘤细胞的感染效率。
- 任鹏康韦芳李惠明王丰张巨峰陈霞芳李宗海黄倩
- 关键词：腺病毒整合素基因治疗
- 重组腺病毒介导绿色荧光蛋白基因对小鼠眼组织的转染和表达被引量：2
- 2007年
- 目的研究不同剂量Ad5-EGFP前房注射后,报告基因在小鼠眼部组织的表达情况及分布特点。方法24只BALB/c小鼠随机分组。实验组以不同浓度梯度前房注射Ad5-EGFP。对照组前房分别注射PBS和不给予任何注射。观察活体眼部组织EGFP表达情况及阳性细胞的类型。结果低浓度注射组在各个时间点眼表均未观察到EGFP荧光表达。高浓度注射组在注射病毒第1d即可以观察EGFP的表达,在第10d时眼表EGFP荧光亮度、范围增加最为明显。EGFP在角膜内皮细胞、虹膜色素上皮细胞及小梁网阳性表达。结论Ad5型腺病毒载体定向携带报告基因在眼前节表达,为眼前节疾病的基因治疗提供了实验依据。
- 于慧吴继红张圣海刘新建张巨峰易苗英黄倩
- 关键词：角膜内皮细胞报告基因
- 选择性复制型腺病毒介导的自杀基因HSV-tk在肿瘤基因治疗中的应用被引量：2
- 2006年
- 自杀基因治疗是肿瘤基因治疗的手段之一,治疗效果与自杀基因能否被高效、选择性的导入肿瘤细胞有关。肿瘤选择性复制型腺病毒(Conditionally replication adenovirus,CRAds)可以特异性的在肿瘤细胞中复制,在复制的同时所携带的治疗基因也大量表达。由CRAds介导的自杀基因,实现了对肿瘤的病毒治疗和基因治疗的结合,提高了治疗效率和使用复制型腺病毒的安全性。
- 张巨峰黄倩
- 关键词：自杀基因肿瘤基因治疗
- CD真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达
- 2006年
- 目的：构建含自杀基因胞嘧啶脱氨酶(CD)的真核表达载体pcDNA3．1／HA-myc-His(-)Z-CD,并进行哺乳动物细胞HEK293转染研究。方法：以本实验室保存的含CD基因全长的质粒为模版,用PCR方法扩增CD基因阅读框序列,并定向克隆到带有HAtag的pcDNA3．1／HA-myc-His(-)Z载体上,使目的基因与HAtag在同一阅读框。重组体质粒经EcoRI和BamHI双酶切鉴定,并对插入的CD基因片段进行测序,将鉴定好的阳性重组质粒pcDNA3．1／HA-myc-His(-)Z-CD用脂质体介导转染HEK293,提取细胞蛋白,western blot检测CD基因的表达情况。结果：阳性重组质粒pcDNA3．1／HA-myc-His(-)Z CD经EcoRI和BamHI双酶切后,获得约为5．5kb片段和1．3kb插入片段,序列分析表明插入的片段与GenBank发布的序列一致,western blot检测到CD基因的表达。结论：成功构建了含自杀基因CD的真核表达质粒。
- 张巨峰韦芳李惠明黄陈于慧裘玮黄倩
- 关键词：自杀基因CD基因基因表达
- 分泌睫状神经营养因子腺病毒载体的构建及小量复制病毒增强其分泌表达的研究
- 2011年
- 目的:探讨复制型腺病毒能否增强增殖缺陷型腺病毒Ad5-hCNTF所携带外源基因的表达分泌。方法:亚克隆获得分泌型睫状神经营养因子的基因(ciliary neurotrophic factor),然后将此基因插入到穿梭质粒pshuttle。pshuttle-hCNTF经pme1酶切后,CIAP去磷酸化,利用Ad-EASY腺病毒制备系统,将其与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共同转化大肠杆菌BJ5183,通过同源重组,筛选出含目的基因的重组型腺病毒质粒的菌株,获得大量该质粒后转染病毒包装细胞AD-293,成功包装出一种血清5型增殖缺陷型腺病毒Ad5-hCNTF。结果:经PCR鉴定该病毒含有该基因片断,Western blotting证实该病毒感染细胞后能表达CNTF蛋白。采用ELISA法检测培养液证实感染细胞能高水平地分泌CNTF。结论:体外实验表明在不同滴度的复制型腺病毒Ad5-E1+E3+的带动下,该病毒感染细胞后分泌表达目的蛋白的水平显著提高,为今后应用Ad作为基因治疗的载体提供实验证据。
- 李惠明裘玮王丰韦芳张巨峰陈霞芳黄倩
- 关键词：腺病毒睫状神经营养因子基因分泌表达
- GSTT1、GSTM1基因多态性与重度慢性牙周炎易感性关系的研究被引量：1
- 2006年
- 目的:研究GSTT1+/0和GSTM1+/0基因型及其联合基因型与重度慢性牙周炎(chronic periodontitis,CP)易感性的关系。方法:用聚合酶链反应检测50例重度慢性牙周炎患者和51例正常对照者的GSTT1+/0、GSTM1+/0的基因型。结果:GSTM1(0/0)和GSTT1(0/0)基因型及GSTM1(0/0)与GSTT1(0/0)联合基因型对重度慢性牙周炎相对危险度(OR)分别为9.56(95%CI,3.88-23.59),8.68(95%CI,3.50-21.51),36.83(95%CI,10.42-130.13)。结论:在内蒙古汉族人群中,基因型GSTT1(0/0)和GSTM1(0/0)增加了个体对重度慢性牙周炎易感性,且上述两种基因型间存在协同作用。
- 张巨峰周立社彭志平秦文斌雎天林
- 关键词：慢性牙周炎基因多态性GSTM1基因易感性
- 应用表达载体介导siRNA抑制胰腺癌STAT3基因表达的研究被引量：4
- 2006年
- 目的探讨表达载体介导小干扰RNA(siRNA)对人胰腺癌细胞系SW1990转录激活因子-3(STAT3)表达的抑制作用。方法设计合成3种可编码后形成小发夹结构针对STAT3基因的siRNA的DNA序列,将其连入pRNAT-U6．1／Neo质粒中,构建STAT3 siRNA表达载体。表达载体进行PCR及测序鉴定,并分别转染SW1990细胞,实时定量PCR和Western blot观察SW1990细胞转染后STAT3 mRNA和蛋白表达的改变。结果PER和DNA测序证实携带3种STAT3 siRNA表达载体构建成功,分别转染SW1990细胞后,STAT3基因的mRNA和蛋白表达量与空质粒转染相比均明显下降(P< 0．05),其中,第二种STAT3 siRNA作用明显,可使mRNA和蛋白表达水平分别下降63％和60％。结论本研究构建的STAT3 siRNA表达载体可有效抑制SW1990细胞STAT3的mRNA和蛋白表达,为下一步以STAT3为靶点的胰腺癌基因治疗实验研究奠定了基础。
- 黄陈裘正军李惠明张巨峰曹俊黄克俭张放江弢刘俊
- 关键词：RNA干扰STAT3胰腺肿瘤
- 利用腺病毒提高腺相关病毒对肿瘤细胞的转导效率被引量：1
- 2007年
- 目的探讨小量腺病毒作为辅助病毒能否增强腺相关病毒(AAV)对肿瘤细胞和裸鼠肿瘤模型的转导效率并对增强的机理进行初步探讨。方法采用绿色荧光蛋白(EGFP)标记的AAV2联合不同滴度的非复制型腺病毒(Ad-null)感染人非小细胞肺癌细胞系(AAV2+Ad-null 组),并以相同剂量的 AAV2单独感染(AAV2组)作为对照。用荧光显微镜观察 EGFP 阳性细胞,流式细胞仪检测 EGFP 阳性细胞的百分率和单个细胞平均荧光强度,Western 印迹检测 EGFP 蛋白表达的变化以比较各组病毒转导效率。换用萤光素酶(Luc)标记的 AAV2,通过 Luc 检测系统检测两组对体外肿瘤细胞及裸鼠肿瘤模型的转导效率。荧光定量 PCR 检测感染后肿瘤细胞 DNA 及 mRNA 的 EGFP相对拷贝数,观察 Ad-null 对 AAV2复制及转录的影响。结果随着 Ad-null 滴度的增加,AAV2+Ad-null组的肿瘤细胞 EGFP 阳性细胞数明显增加。流式细胞仪计数的 EGFP 阳性细胞率按0.01、0.1、1、10 MOI Ad-null 滴度依次为10.9%,18.0%,36.2%,55.2%,明显高于 AAV2组(6.4%)。AAV2+10 MOI Ad-null 组单个细胞的荧光强度约为 AAV2组的1.32倍。各 AAV2+Ad-null 组 EGFP在细胞中的蛋白表达水平也均高于 AAV2组。体外、体内Luc检测均显示 Ad-null 显著增强 AAV2对肿瘤的转导效率,荧光素信号分别为 AAV2单独感染的28和4.5倍。Ad-null 可提高肿瘤细胞内AAV2的 mRNA 水平,当 Ad-null 滴度为1、10 MOI 时 AAV2+Ad-null 组的 EGFP 拷贝数明显高于AAV2组,而 Ad-null 对细胞内 AAV2的 DNA 影响不大,AAV2+Ad-null 组与 AAV2组的 EGFP 拷贝数差别不大。结论联合使用少量腺病毒可明显提高 AAV 对肿瘤细胞的转导效率,可能与其提高AAV 转录水平有关,为今后应用 AAV 作为肿瘤基因治疗的载体提供了实验证据。
- 李惠明王丰韦芳董小岩王慧萍裘玮张巨峰陈霞芳吴小兵黄倩
- 关键词：肿瘤基因疗法腺病毒腺相关病毒转导
- STAT3短发卡RNA表达载体对胰腺癌细胞增殖凋亡的影响
- ＜正＞目的构建信号转导与转录激活因子-3（signal transduction and activators oftranscription,STAT3）短发卡 RNA（short hairpin RNA,shRNA）...
- 裘正军黄陈张巨峰曾俊黄克俭张放江弢朱麟
- 关键词：STAT3胰腺癌增殖凋亡
- 文献传递
