韦芳
- 作品数：44 被引量：106H指数：5
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 加热调控的溶瘤腺病毒载体构建及其特征研究被引量：2
- 2009年
- 溶瘤腺病毒作为近年来新兴的肿瘤基因治疗策略,因具有"细胞溶解"和"旁观者效应"而备受关注.构建了受热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)基因启动子调控的溶瘤腺病毒载体Ad-HSP70p-E1A,观察该病毒与热疗联合应用对肺癌细胞生长的抑制作用和带动治疗基因在肺癌细胞中表达的效果.体外实验结果表明,Ad-HSP70p-E1A在肺癌细胞株A549内能较好地实现自身复制,并产生一定的溶瘤作用,在联合热疗后,Ad-HSP70p-E1A的自身复制能力和溶瘤效果分别增强了2～10倍和5倍以上.此外,Ad-HSP70p-E1A还可通过反式提供E1A蛋白而使10moi用量的复制缺陷型腺病毒AdGFP、Ad-CMV-hGMCSF和Ad-CMV-mIL12的表达提升76.64倍、5倍和7倍.
- 韦芳王慧萍陈霞芳李川源黄倩
- 关键词：溶瘤腺病毒热疗基因治疗肺癌
- 表达分泌型脑源性神经营养因子的腺相关病毒载体的构建及其表达的检测被引量：3
- 2008年
- 采用PCR和体外连接的方法构建了带有信号肽的脑源性神经营养因子(BDNF)的融合基因,将此基因插入到腺相关病毒载体穿梭质粒pSNAV,然后用重组质粒pSNAV-Ig-BDNF转染包装细胞,筛选出永久细胞株后,用携带腺相关病毒rep及cap基因的单纯疱疹病毒超感染包装细胞,成功包装出含有目的基因的一型血清型腺相关病毒。经PCR鉴定该病毒含有目的基因片段,被该病毒感染的细胞裂解液经Western blotting证实有BDNF表达,其培养液经ELISA检测证实含有高水平的BDNF蛋白。该病毒与小量的非复制型腺病毒Ad-null联合应用时,其BDNF蛋白的表达水平显著提高。可弥补腺相关病毒起效慢、对细胞转导效率低的弱点,为今后应用AAV作基因治疗提供了实验证据。
- 李惠明裘玮王丰韦芳陈霞芳吴小兵黄倩
- 关键词：腺相关病毒脑源性神经营养因子基因表达基因治疗
- CD真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达
- 2006年
- 目的：构建含自杀基因胞嘧啶脱氨酶(CD)的真核表达载体pcDNA3．1／HA-myc-His(-)Z-CD,并进行哺乳动物细胞HEK293转染研究。方法：以本实验室保存的含CD基因全长的质粒为模版,用PCR方法扩增CD基因阅读框序列,并定向克隆到带有HAtag的pcDNA3．1／HA-myc-His(-)Z载体上,使目的基因与HAtag在同一阅读框。重组体质粒经EcoRI和BamHI双酶切鉴定,并对插入的CD基因片段进行测序,将鉴定好的阳性重组质粒pcDNA3．1／HA-myc-His(-)Z-CD用脂质体介导转染HEK293,提取细胞蛋白,western blot检测CD基因的表达情况。结果：阳性重组质粒pcDNA3．1／HA-myc-His(-)Z CD经EcoRI和BamHI双酶切后,获得约为5．5kb片段和1．3kb插入片段,序列分析表明插入的片段与GenBank发布的序列一致,western blot检测到CD基因的表达。结论：成功构建了含自杀基因CD的真核表达质粒。
- 张巨峰韦芳李惠明黄陈于慧裘玮黄倩
- 关键词：自杀基因CD基因基因表达
- 小干扰RNA抑制雄激素受体基因表达对人膀胱癌T24细胞增殖及凋亡的影响被引量：5
- 2009年
- 目的 观察小干扰RNA技术（siRNA）抑制雄激素受体（AR）基因的表达对人膀胱癌T24细胞增殖及凋亡的影响。方法化学合成针对AR的siRNA，用脂质体转染T24细胞。采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Westernblot检测ARmRNA和蛋白的变化。转染细胞48h后用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞体外增殖活性的变化，流式细胞术检测细胞的凋亡状况。结果成功的转染T24细胞，实时荧光定量RT—PCR筛选出一条ARmRNA抑制效率最高的siRNA，行Westernblot检测可抑制AR蛋白表达至70．3％。转染细胞48h后，T24细胞增殖活性抑制率达到（25．9±5．4）％，细胞凋亡率达到21．61％。结论应用siRNA干扰技术能有效的抑制AR基因的表达，同时可抑制人膀胱癌T24细胞的体外增殖活性及促进其凋亡的发生。
- 吴吉涛韩邦旻赵福军王慧萍李惠明卓见韦芳夏术阶
- 关键词：雄激素受体脱噬作用
- 14株肿瘤细胞P53基因突变的检测被引量：6
- 2008年
- 目的：检测14株肿瘤细胞P53基因的突变情况。方法：根据P53基因5～8外显子之间的内含子序列设计引物,分别对人肺癌、脑胶质瘤、肝癌、胃癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、脉络膜恶性黑素瘤、视网膜成细胞瘤等9种肿瘤14株细胞的P53基因5、6、7、8的外显子进行PCR扩增反应。琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物;DNA测序,并与正常的DNA序列比较;抽提肿瘤细胞蛋白进行Western blotting检测P53蛋白的表达。结果：14株肿瘤细胞P53基因热变区5、6、7、8外显子的扩增产物经电泳鉴定与预期相同。DNA测序结果表明,14株肿瘤细胞中8株存在P53基因5～8外显子的突变,其中肺癌细胞H1299、肝癌细胞Hep3B、肝癌细胞SMMC7721、脉络膜恶性黑素瘤细胞OCM-1检测到以前未报道过的突变;突变主要发生在外显子的编码序列,多数为单个碱基替换导致的错义突变,也有部分表现为同义突变;2株正常细胞未检测到突变。Western blotting检测显示,有基因突变的8株肿瘤细胞中仅6株有P53蛋白表达;所有P53基因未突变的肿瘤细胞株和正常细胞株均未检测到P53蛋白。结论：检测的14株肿瘤细胞中有8株细胞P53基因热变区存在突变,其中4株检测到以前未报道过的突变;2株正常细胞未发现P53基因突变。
- 马家烈韦芳李惠明田毓华陈霞芳王丰黄倩
- 关键词：肿瘤细胞P53基因基因突变
- 一种受转录和转录后双调控的溶瘤腺病毒及其构建方法
- 本发明属生物医学领域，涉及溶瘤腺病毒，具体涉及一种受组织或细胞特异性启动子(转录水平)和microRNA(转录后水平)双调控的新型溶瘤腺病毒及其构建方法，构建的双调控溶瘤腺病毒比仅受组织或细胞特异性启动子调控的溶瘤腺病毒...
- 王慧萍韦芳王荣花
- 文献传递
- 艾灸抑制小鼠皮下移植瘤生长的活体成像观察
- 2014年
- 目的:观察艾灸对小鼠皮下移植瘤的抑制作用。方法:通过慢病毒转染,构建能稳定表达荧光素酶基因的乳腺癌细胞株,建立小鼠皮下移植瘤模型后通过随机区组方法设为对照组和治疗组,治疗组又分为关元组、大椎组。治疗组艾灸隔天一次,每次10min,共7次,对照组不做处理。通过活体成像系统以及体外测量,监测肿瘤生长情况。治疗终点,处死小鼠,HE染色观察肿瘤的病理形态学变化。结果:建立能稳定表达荧光素酶基因的乳腺癌细胞株及小鼠皮下移植瘤模型,细胞数与荧光强度呈线性关系(r=0.899)。活体成像显示:治疗组小鼠荧光强度较对照组明显减弱。体外测量,治疗组肿瘤体积及重量明显小于对照组(P<0.05),关元组和大椎组肿瘤体积和重量差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,治疗组的肿瘤组织可见较多炎症细胞、嗜酸性增强。结论:艾灸对乳腺癌移植瘤生长有明显的抑制作用。活体成像技术可动态、连续地观察肿瘤生长变化,为临床用药提供理论依据。
- 周俊梅韦芳刘素君张必萌
- 关键词：艾灸皮下移植瘤小鼠活体成像
- 血管及淋巴管生成相关基因表达与肿瘤转移率和转移途径的比较分析被引量：5
- 2008年
- 目的：研究促进血管及淋巴管生成因子——血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）-A、-C、-D表达水平与肿瘤转移率及转移途径的关系，探讨其在肿瘤转移方面所起的作用，以及是否可作为判断肿瘤转移和预后的指标。方法：建立2种小鼠和4种人的肿瘤动物模型，观察肺、肝及腹股沟、腋下、髂血管和腹主动脉旁淋巴结大小及肿瘤转移情况。实时荧光定量．PCR（real—time fluorogentic quantitative PCR，RFQ—PCR）检测体外培养的肿瘤细胞及小鼠体内生长的肿瘤组织内VEGF—A、-C、-D及血管内皮生长因子受体（vascular endothelial growth factor receptor，VEGFR）-2、-3和淋巴管内皮细胞标志物——淋巴内皮细胞透明质酸受体-1（lymphatic vessel endothelial HA receptor—1，LYVE—1）的表达水平。结果：2种小鼠和4种人的肿瘤动物模型中61％～100％出现了肺转移，16％～100％出现了肝转移，2种小鼠肿瘤动物模型中26％～100％出现了淋巴结转移。结果表明，VEGF—A在肿瘤组织中表达量的增加将伴随着更高的肝、肺转移率。肿瘤组织中VEGF—C的表达水平与肿瘤的淋巴转移存在相关性，但VEGF—D表达水平增加与肿瘤淋巴结转移的发生率并不平行。结论：VEGF—A表达水平与肿瘤血道转移关系密切，VEGF—C在肿瘤淋巴结转移中起重要作用。
- 王丰韦芳陈霞芳田毓华易苗英谢匡成黄倩
- 关键词：肿瘤转移血管生成病理性淋巴管生成基因表达
- 电针对膝骨关节炎MIA模型大鼠滑膜组织中MMP-3/TIMP-1表达的影响被引量：14
- 2014年
- 目的:观察电针与塞来昔布治疗大鼠膝骨关节炎后,大鼠滑膜组织中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)含量的变化。方法:选用SD大鼠40只,采用随机数字表随机分成正常组、模型组、药物组和电针组,每组各10只。通过向SD大鼠左侧关节腔内注射单体碘乙酸钠(MIA)并驱赶大鼠运动来建立膝骨关节炎MIA模型。造模两周后,对电针组取"后三里"穴、"阳陵泉"穴进行电针治疗;对药物组给予塞来昔布灌胃治疗;正常组跟造模组不做任何干预。结果:模型组滑膜组织中MMP-3和TIMP-1的含量较正常组显著提高(P<0.05),但MMP-3和TIMP-1的变化不同步;经过两周的治疗,电针组跟药物组滑膜组织中的MMP-3和TIMP-1含量较造模组显著降低(P<0.05),但仍然略高于正常组。电针治疗组和药物治疗组中两者含量相近(P>0.05),无统计学意义。结论:电针能有效平衡MIA膝骨关节炎模型大鼠中MMP-3和TIMP-1的异常表达,这可能是电针治疗膝骨关节炎有效的机制之一,为针灸治疗膝骨关节炎提供了有力的证据。
- 刘苗苗韦芳潘超安杨洋徐斯伟周俊梅张必萌
- 关键词：MMP-3TIMP-1膝骨关节炎滑膜组织MMP-3TIMP-1
- 肝癌选择性溶瘤腺病毒的构建及其体外抑瘤作用被引量：1
- 2009年
- 目的:构建由AFP基因增强子-启动子调控,并携带自杀基因TK的新型条件复制型腺病毒载体,观察该载体的选择复制能力、溶瘤作用及其与前药GCV联合处理对肝癌细胞的杀伤作用。方法:以HepG2基因组DNA为模板,PCR扩增AFP基因启动子(AFPp)和增强子(AFPe),构建表达质粒pAFPp-EGFPluc和pAFPep-EGFPluc,再构建由AFPep调控E1A表达、并携带TK基因的穿梭质粒pDC311-AFPep-E1A/CMV-TK,利用AdMax系统包装腺病毒Ad.AFPep-E1A/CMV-TK;利用Western blotting、病毒增殖测试、细胞病变效应实验、病毒联合前药GCV对肝癌细胞的杀伤实验等鉴定病毒的复制能力、溶瘤作用和对肝癌细胞的杀伤作用。结果:成功构建的腺病毒载体Ad.AFPep-E1A/CMV-TK在AFP阳性细胞中选择性复制,病毒自身具有一定的溶瘤作用;该病毒载体联合GCV前药系统处理肝癌细胞后,AFP阳性肝癌HepG2细胞和Hep3B细胞的存活率分别为(10.35±1.07)%、(15.49±5.80)%,AFP阴性的张氏肝细胞和人肺癌NCIH460细胞的存活率分别为(73.55±4.36)%、(74.54±9.89)%(P<0.01)。结论:构建的新型溶瘤腺病毒载体具有选择性杀伤肝癌细胞的能力,在肝癌治疗方面有良好的应用前景。
- 傅强王慧萍韦芳李慧明陈霞芳王煜非黄倩
- 关键词：肝肿瘤
