李昳
- 作品数：9 被引量：59H指数：4
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- 一种新型全自动末梢血细胞混匀仪对血小板结果的影响被引量：2
- 2018年
- 目的:制定BY-1型全自动末梢血细胞混匀仪对血小板计数使用参数。方法:对30例健康供体末梢血用手工法和末梢血细胞混匀仪混匀法比较使用不同温度(10~37℃)和不同时间(10~160s)对血小板结果影响;采集30例健康供者、30例血小板高于参考区间的患者和30例血小板低于参考区间的患者末梢血分别用仪器法和手工法混匀计数血小板,并进行两者比较;每一样本均用静脉血为对照组,并将本研究结果与静脉血细胞分析结果进行比较。结果:将末梢血细胞混匀仪温度设定为30℃,然后分别混合10~160s,结果表明末梢血混匀时间在40~80s时,各指标比较稳定,与对照组结果相近;混匀时间在20s内结果不稳定,超过100s时结果明显高于对照组。将末梢血细胞混匀仪混匀时间设定为60s,然后在10~37℃状态下分别混匀并计数,混匀仓温度为10℃时血小板结果最低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);混匀仓温度在15~37℃范围对结果影响不明显,以30℃时结果最稳定。分别用仪器和手工法混匀后检测低值、高值和正常值各30例末梢血血小板样本,2种混匀方法计数的血小板结果,在组内之间比较大多数差异明显,各值组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:末梢血细胞混匀仪在设定最佳温度和混匀时间后混合的样本计数血小板结果准确性和稳定性明显好于手工混匀法。
- 李昳骆小梅王冬刘军权
- 关键词：血小板计数温度
- 不同刺激因子对人CIK细胞功能影响被引量：12
- 2013年
- 本研究观察不同的细胞刺激因子共刺激对人CIK细胞增殖和功能的影响。用淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞(PBMNC),按常规方法从PBMNC培养细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞),然后根据加入CD28 mAb、IL-15和IL-21将实验分为5组:对照组(CIK),CB28+IL-15+IL-21组,IL-15+IL-21组,CD28+IL-15组和CD28+IL-21组。用全自动五分类血液分析仪计数CIK细胞的增殖能力;用流式细胞术测定细胞刺激因子诱导的CIK细胞的粒酶B(granzyme B),穿孔蛋白(perforin)和CD107α等分子的变化;用ELISA法检测细胞因子IL-10、IL-12、INF-γ和TNF-α的含量;乳酸脱氢酶释放法测定细胞刺激因子共刺激的细胞对人肺癌细胞株A549(A549)、乳腺癌细胞株MFC-7(MFC-7)和人黑素瘤细胞株HME1(HME1)的杀伤活性。结果表明,在CIK细胞培养体系中加入不同的刺激因子,细胞增殖能力有明显的差异,以含CD28、IL-15和IL-21组细胞增殖倍数最高,在培养第10日时该组的增殖倍数为255.3±6.3,明显高于对照组,IL-21+IL-15组和CD28+IL-21组细胞增殖倍数分别为166.6±13.5、199.4±15.0和228.8±16.6(P<0.05),添加CD28和IL-15组则穿孔蛋白含量明显高于其他组。所有共刺激组的穿孔蛋白、粒酶B和CD107a表达百分率均明显高于对照组(P<0.05)。对A549、MFC-7和HME1细胞杀伤活性以含CD28+IL-15组最高(82.2%、59.3%和70.6%),明显高于对照组(60.9%、49.6%和48.4%)(P<0.05)。在CIK细胞培养体系中增加CD28+IL-15+IL-21组中细胞分泌IFN-γ量显著高于其他各组(P<0.05)。结论:不同刺激因子活化的CIK细胞的增殖能力、分泌细胞因子和杀伤活性有明显差异,在培养体系中增加相应的细胞刺激因子对细胞功能定向培养有一定意义。
- 刘军权朱云陈复兴周燏姬会春杨宛莹吕小婷张颂陶征中李昳
- 关键词：共刺激CIK细胞细胞因子杀伤活性
- 阿托伐他汀对人NK细胞杀伤结肠癌细胞的影响及其机制研究被引量：6
- 2017年
- 目的:探讨阿托伐他汀对人NK细胞杀伤结肠癌细胞的影响及其机制。方法:不同浓度的阿托伐他汀作用于3株结肠癌细胞(HCT-116、SW-480、Caco-2),CCK-8法测定阿托伐他汀对结肠癌细胞生长抑制率的影响。SCGM培养基体外扩增人NK细胞,自动生化分析仪测定NK细胞对3株结肠癌细胞的杀伤活性;流式细胞仪检测结肠癌细胞MICA/B的表达率。结果:(1)NK细胞的培养:培养前CD3-CD56+的NK细胞占外周血单个核细胞的比例为4.5%,培养10 d时NK细胞的比例增至93.1%。(2)阿托伐他汀对3株结肠癌细胞生长抑制率的影响:阿托伐他汀作用48 h后,在浓度5~40μmol/L的4个实验组中,HCT-116细胞的生长抑制率较对照组升高(P<0.05)。作用96 h后,在1.25~40μmol/L的所有浓度组(6个)中,HCT-116细胞的生长抑制率均显著高于对照组(P<0.05)。另外,HCT-116细胞的生长抑制率随着阿托伐他汀浓度的升高而逐渐上升,相关分析显示,阿托伐他汀的浓度与HCT-116细胞的生长抑制率呈正相关(r[48 h]=0.13,r[96 h]=0.22,P<0.05)。(3)NK细胞经阿托伐他汀作用96 h后,除浓度为20μmol/L和40μmol/L时抑制率高于对照组,其他各组对NK细胞生长无明显影响。(4)阿托伐他汀对NK细胞杀伤结肠癌细胞活性的影响:NK细胞对HCT-116细胞的杀伤活性在阿托伐他汀浓度2.5~10μmol/L组均显著高于对照组,对SW-480的杀伤活性在5~20μmol/L组较对照组明显升高,对Caco-2的杀伤活性在2.5~20μmol/L组显著高于对照组(P<0.05),其中同一浓度时对HCT-116细胞杀伤作用最强。(5)阿托伐他汀对结肠癌细胞MICA/B表达的影响:在阿托伐他汀浓度2.5μmol/L及5μmol/L组,HCT-116细胞MICA/B的表达率与对照组比较显著升高(P<0.05),在10μmol/L及20μmol/L组,SW-480细胞MICA/B表达率显著高于对照组(P<0.05),在2.5~40μmol/L组,Caco-2细胞MICA/B的表达率均较对照组显著升高(P<0.05)。结论:(1)阿托伐他汀能够呈剂量依赖性抑制结肠癌细胞HCT-116�
- 姬会春刘军权周燏李昳陈复兴费素娟
- 关键词：阿托伐他汀结肠癌细胞NK细胞
- 多种活化因子共刺激对人外周血单个核细胞体外增殖和表型的影响被引量：11
- 2012年
- 目的:观察多种活化因子共刺激后对人外周血淋巴细胞增殖和表型的影响。方法:用淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞(PBMC),根据加入刺激因子(CD3 mAb、CD28 mAb、IFN-γ、IL-1α、IL-2、IL-15和IL-21)种类和方法不同将实验分为7组。用全自动五分类血液分析仪计数不同细胞因子诱导培养的PBMC增殖力、流式细胞术测定诱导后共刺激细胞表面CD3,CD4,CD8,CD28,CD16、CD56+CD16,CD3+CD8+,CD3+CD4+,CD3+CD56+,CD45RO等分子的变化、乳酸脱氢酶释放法测定诱导后的共刺激细胞对SGC-7901、SW-1990和SW-116细胞株的杀伤活性。结果:在PB-MC培养体系中加入不同的刺激因子其细胞增殖能力有明显的差异,以含刺激因子CD3、CD28、IFN-γ、IL-2、IL-1α、IL-15和IL-21组增殖倍数最高,在培养第10 d时该组的增殖倍数为255.3 6.3,明显高于仅含CD3、IFN-γ和IL-2培养体系组(166.6 5.5)(P<0.05)。在PBMC培养体系中加入不同的刺激因子其部分细胞表面标志有所差异,在培养体系中无IL-15时CD16+CD56+(NK细胞)细胞和CD3+CD56+细胞比例明显高于其他组;CD45RO+的记忆性T细胞以延迟3 d添加IL-15和IL-21组升高最明显。经不同活化因子刺激培养10 d的PBMC对SGC-7901、SW-1990和SW-1116细胞杀伤活性有明显差异,以延迟3 d添加IL-15和IL-21组最高(分别为76.2%、60.3%和70.6%),明显高于仅含CD3、IFN-γ和IL-2培养体系的细胞组(分别为54.9%、44.6%和50.4%)(P<0.05)。培养的细胞对胃腺癌细胞SGC-7901杀伤活性最强。结论:不同刺激因子活化的PBMC其增殖能力、表面标记和杀伤活性有明显差异,在培养体系中增加相应的刺激因子对细胞定向培养有一定价值。
- 刘军权朱云陈复兴张南征吕小婷周忠海张娟张颂陶征中李昳
- 关键词：共刺激单个核细胞增殖杀伤活性
- 聚肌胞苷酸对肺癌细胞A549生长和功能影响
- 2011年
- 探讨聚肌胞苷酸(polyI∶C)对肺腺癌细胞(A549)增殖、周期、凋亡及γδT细胞对其杀伤活性的影响。用MTT法检测经polyI∶C处理后的γδT细胞和A549的生长抑制率;流式细胞仪检测经polyI∶C处理后A549 TLR3变化及对细胞周期和凋亡的影响;用乳酸脱氢酶释放法测定γδT细胞对经polyI∶C诱导后的A549杀伤活性。肺癌细胞株A549经25μmol/L polyI∶C诱导24 h后细胞凋亡率为(39.44%±4.11%),明显高于对照组凋亡率(28.72%±1.41%)(P<0.05);细胞周期有一定的改变;肿瘤细胞上TLR3表达没有明显变化。A549在25μmol/L PolyI∶C处理后,其与γδT细胞在效靶比为1∶80时杀伤活性明显高于对照组。polyI∶C能抑制A549细胞生长,增加γδT细胞对诱导后的A549细胞杀伤敏感性。
- 陈玲刘军权周忠海吕小婷黄菲陶征中李昳陈复兴
- 关键词：肺腺癌细胞株A549ΓΔT细胞杀伤活性
- Gardiquimod增强人γδT细胞杀伤肿瘤细胞的研究被引量：2
- 2011年
- 目的研究Toll样受体7激动剂（Gardiquimod）对人γδT细胞杀伤肿瘤作用的影响。方法以异戊烯焦磷酸法扩增人外周血γδT细胞。用不同浓度的Gardiquimod处理γδT细胞和肺癌细胞A549,MTT法检测细胞增殖情况。LDH法检测Gardiquimod处理后γδT细胞对A549的杀伤活性;流式细胞术检测处理前后γδT细胞上CD107a、穿孔素和颗粒酶的表达情况。结果 Gardiquimod在5.0~0.31μg/ml浓度可明显促进γδT细胞增殖,同时抑制A549增殖。Gardiquimod处理γδT细胞后,杀伤A549能力明显增强,且CD107a、颗粒酶及穿孔素的表达显著升高,与对照组相比,有统计学差异（P〈0.05）。结论 Gardiquimod通过增高γδT细胞上的CD107a、颗粒酶及穿孔素的表达来增强其杀伤肿瘤作用。
- 周燏刘军权周忠海吕小婷陈玲孙蕾清李昳陈复兴
- 关键词：ΓΔT细胞肺癌细胞A549杀伤肿瘤
- β-谷甾醇对人共刺激细胞杀伤胃癌SGC-7901细胞的影响及其机制的探讨被引量：23
- 2014年
- 目的探讨β-谷甾醇对用多种细胞因子和刺激分子联合诱导培养的人外周血单个核细胞（共刺激细胞）杀伤胃癌SGC-7901细胞的影响及其机制。方法分离健康者外周血单个核细胞（PBMC）在体外经多种细胞因子诱导为共刺激细胞,不同质量浓度的β-谷甾醇分别作用于共刺激细胞及胃癌SGC-7901细胞24、48、72 h后,CCK8法检测共刺激细胞的生长,MTT法检测胃癌SGC-7901细胞的生长,FCM检测共刺激细胞PFP、GraB、CD107a、IFN-γ的表达;LDH释放法检测共刺激细胞对SGC-7901细胞的杀伤活性;Western blot检测共刺激细胞中p-ERK1/2、Bcl-2的表达情况。结果培养10 d后,共刺激细胞增殖倍数达高峰。与对照组比较,质量浓度2.5~10μg/ml的β-谷甾醇作用后共刺激细胞的增殖率显著提高（P〈0.05）,质量浓度10~80μg/ml的β-谷甾醇对SGC-7901细胞生长抑制率显著提高（P〈0.05）,并且0.3~5μg/ml的β-谷甾醇作用后的共刺激细胞对SGC-7901细胞的杀伤活性明显增强（P〈0.05）,共刺激细胞中PFP、GraB、IFN-γ及p-ERK1/2、Bcl-2的表达较对照组显著增加（P〈0.05）。结论β-谷甾醇在一定质量浓度范围内能够促进共刺激细胞的增殖,并增强其对胃癌SGC-7901细胞的杀伤活性,其机制可能与β-谷甾醇上调共刺激细胞PFP、GraB、IFN-γ的表达,活化p-ERK1/2、Bcl-2有关。
- 王娟刘军权陈复兴周忠海陈永强李昳骆晓梅罗冠琴杨阳朱炳喜
- 关键词：Β-谷甾醇SGC-7901
- 抗CD28单抗和IL-15对CIK增殖和杀肿瘤作用的研究被引量：4
- 2012年
- CIK是肿瘤过继性细胞免疫治疗中的免疫效应细胞。为使CIK在实验室里能被更有效地诱导增殖并赋予其更强的杀肿瘤效应,我们在CIK常规培养环境中加入抗CD28单抗和IL-15,探讨抗CD28单抗和IL-15对CIK增殖和杀肿瘤效应。取人外周血单个核细胞(PBMC),预先以常规方法诱导CIK,然后加入抗CD28单抗和IL-15与CIK共培养。用全自动五分类血液分析仪计数CIK增殖率;用流式细胞术测定CIK中粒酶B、穿孔素和CD107a等分子的表达率;用ELISA方法检测CIK分泌IL-10、IL-12、INF-γ和TNF-α水平;用乳酸脱氢酶释放法测定CIK对人肺癌细胞株(A549)、乳腺腺癌细胞株(MFC-7)和人黑素瘤细胞株(HME1)的杀伤活性。PBMC经常规CIK诱导培养以后再加入抗CD28单抗和IL-15与对照组比较,前者细胞增殖率明显增强(P<0.05);在CIK培养体系中加入抗CD28单抗和IL-15可促进颗粒酶B、穿孔素和CD107a等分子的表达率进一步增强(P<0.05);加入抗CD28单抗和IL-15,培养8d后CIK对A549、MFC-7和HME1细胞杀伤活性分别为82.2%、59.3%和70.6%,与对照组(分别为60.9%、49.6%和48.4%)相比差异有统计学意义(P<0.05);在培养体系中加入抗CD28单抗和IL-15,培养8d后其细胞因子IFN-γ、TNF-α分泌水平显著高于对照组(P<0.05),组间IL-10和IL-12的分泌量未见显著差异(P>0.05)。实验说明在CIK培养体系中加入抗CD28单抗和IL-15可增加CIK增殖率并提高其抗肿瘤效应。
- 刘军权朱云陈复兴周燏杨宛莹吕小婷张颂陶征中李昳唐莉
- 关键词：IL-15CIK增殖抗肿瘤活性
- 阿托伐他汀对人NK细胞杀伤HCT-116细胞的影响及其机制研究被引量：2
- 2016年
- 目的探讨阿托伐他汀对人自然杀伤细胞（natural killer,NK）杀伤HCT-116细胞的影响及其机制。方法 CCK-8法测定不同浓度的阿托伐他汀对HCT-116细胞生长抑制率的影响。自动生化分析仪测NK细胞对HCT-116细胞的杀伤活性;流式细胞仪（FCM）检测HCT-116细胞MICA/B的表达率。结果不同浓度的阿托伐他汀作用于HCT-116细胞48 h后在浓度为5~40μmol/L及作用96 h后在浓度为1.25~40μmol/L时,对HCT-116细胞的生长抑制率与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。阿托伐他汀浓度相同时,HCT-116细胞的生长抑制率在48 h组与96 h组相比,除5μmol/L浓度组外差异均有统计学意义（P〈0.05）。阿托伐他汀的浓度与HCT-116细胞的生长抑制率呈正相关（r[48 h]=0.13,r[96 h]=0.22,P〈0.05）。NK细胞对HCT-116细胞的杀伤活性在阿托伐他汀浓度为2.5~10μmol/L各组中均显著高于对照组（P〈0.05）。2.5μmol/L浓度组及5μmol/L浓度组,HCT-116细胞MICA/B的表达率与对照组比较显著升高（P〈0.05）。结论阿托伐他汀呈剂量依赖性抑制HCT-116细胞的生长,且延长作用时间可以增强阿托伐他汀对HCT-116细胞生长的抑制作用;还能够增强NK细胞对HCT-116杀伤活性;以及上调HCT-116细胞MICA/B的表达率,提高其免疫原性。
- 姬会春周燏刘军权陈复兴李昳费素娟
- 关键词：阿托伐他汀自然杀伤细胞
