廖志勇
- 作品数：19 被引量：54H指数：4
- 供职机构：南方医科大学珠江医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省科技攻关计划广州市科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 氯霉素乙酰基转移酶融合蛋白表达、纯化和鉴定被引量：1
- 2004年
- 目的对氯霉素乙酰基转移酶(Chloramphenicol acetyltransferase,CAT)基因进行表达和纯化。方法通过PCR扩增编码CAT氨基酸序列的基因片断,并将之克隆入pGEX-2T载体。IPTG诱导蛋白融合表达,产物经琼脂糖亲和层析树脂纯化。免疫印迹鉴定纯化蛋白的抗原性。结果筛选得到的重组子诱导后表达相对分子质量约为52 600的CAT融合蛋白。树脂纯化及酶切后均得到高纯度的蛋白样品。纯化蛋白能与抗CAT抗体特异结合。结论本研究获得了CAT基因的融合表达蛋白,并对其完成纯化,为制备抗血清和抗体打下基础。
- 潘玉先廖志勇郝卫车小燕
- 关键词：融合蛋白纯化
- 真菌感染后的保护性体液免疫研究进展
- 机会性严重深部真菌感染患者的免疫功能低下或者缺陷,预后极差,死亡率较高.因此,考察烟曲霉感染后的机体免疫应答对于曲霉引发疾病的预防、治疗和预后具有明显的指导意义,本文着重就烟曲霉感染后体液免疫的产生机制以及保护性抗体筛选...
- 廖志勇车小燕
- 关键词：真菌感染烟曲霉免疫应答抗体筛选
- 文献传递
- EB病毒特异性增强子CAT报告质粒构建策略
- 2004年
- 构建携带EB病毒特异性增强子oriP不同结构域的CAT报告质粒,以探讨EB病毒特异性增强子与EB病毒核抗原-1结合后的转录增强作用。聚合酶链反应扩增得到增强子oriP全序列,借助于pUC19质粒将其不同结构域克隆到pCAT3Promoter(pCAT3/P)载体。扩增获得oriP全序列;构建得到携带EB病毒特异性增强子Orip不同结构域的CAT报告质粒pCAT3/P-oriP、pCAT3/P-FR、pCAT3/P-DS、pCAT3/P-(FR+DS)等,质粒中目的基因的插入方向经鉴定正确。
- 廖志勇车小燕徐华张丽娅潘玉先郝卫
- 关键词：EPSTEIN-BARR病毒目的基因
- 一组曲霉单克隆抗体的制备及在免疫病理诊断中的研究
- 2008年
- 目的研究一组抗曲霉共同抗原的单克隆抗体,在病理组织切片中特异性诊断曲霉感染的免疫病理学方法。方法采用烟曲霉细胞壁抗原、分泌抗原和灭活分生孢子,分别免疫BALB/c小鼠,制备特异性的抗曲霉单克隆抗体,免疫荧光法鉴定单克隆抗体与曲霉属和念珠属抗原的交叉反应。以单克隆抗体检测侵袭性烟曲霉感染兔模型的肾、肝脏组织切片和SARS合并侵袭性曲霉感染患者和肺曲霉病患者的肺组织切片。结果特异性抗曲霉共同抗原的单克隆抗体可敏感检测组织病理切片中曲霉菌丝体抗原。结论抗曲霉共同抗原的单克隆抗体在免疫病理诊断中为确定组织中曲霉,区分真菌种属提供了有用的工具,具有很好的临床应用前景。
- 郝卫潘玉先廖志勇丘立文王压娣宋朝阳车小燕
- 关键词：曲霉单克隆抗体免疫组化
- 1组曲霉单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的制备并鉴定一组抗曲霉不同抗原的单克隆抗体。方法采用烟曲霉细胞壁抗原成分、分泌抗原和灭活分生孢子,分别免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,免疫荧光法鉴定单克隆抗体与曲霉属和念珠菌属抗原的交叉反应。结果获得29株稳定分泌抗曲霉单抗的杂交瘤细胞株,其中用烟曲霉细胞壁抗原成分免疫获得11株,用分泌抗原免疫获得13株,用孢子免疫获得5株;Ig亚类鉴定,11个克隆株为IgG1亚类,3个克隆株为IgG3,15个克隆株为IgM。免疫荧光法鉴定29株单抗特异性识别烟曲霉细胞壁抗原,与其他曲霉抗原有交叉反应。结论29株单克隆抗体,对于建立侵袭性曲霉感染早期诊断方法、筛选曲霉保护性抗体以及研究抗体保护机制奠定了实验基础。
- 郝卫潘玉先廖志勇丘立文王压娣宋朝阳车小燕
- 关键词：单克隆抗体
- SARS-CoV、229E和OC43的抗原相关性研究被引量：4
- 2006年
- 目的:分析SARS冠状病毒(SARSCoV)和人冠状病毒(229E和OC43)的抗原相关性。方法:制备三株冠状病毒的免疫兔血清及其重组核衣壳(N)蛋白的免疫小鼠血清,分别采用ELISA法、Westernblot和免疫荧光法对免疫血清进行检测以分析三株冠状病毒的抗原相关性。结果:Westernblot结果显示重组N蛋白免疫小鼠血清仅与各自的冠状病毒或重组N蛋白有特异性反应,相互间无交叉反应,而ELISA结果显示OC43重组N蛋白免疫小鼠血清与SARSCoV、229EN蛋白出现了构象抗体的交叉反应。同时,免疫荧光结果显示SARSCoV和OC43免疫兔血清与229E感染细胞存在较明显的交叉反应,但在ELISA、Westernblot结果中全病毒免疫兔血清均仅与各自N蛋白特异性反应,相互间无交叉反应。结论:SARSCoV、229E和OC43N蛋白抗原性在免疫动物血清中不存在交叉反应,而SARSCoV、OC43全病毒免疫血清均和229E出现明显的交叉反应。另外,基因重组的OC43N蛋白与另外二种N蛋白出现重组构形表位的交叉反应,提示以基因重组的蛋白作为诊断试剂,可能会因为蛋白的空间构象发生改变而产生非特异性反应。
- 丘立文王压娣廖志勇梅亚波车小燕
- 关键词：冠状病毒核衣壳蛋白免疫血清抗原性
- EBNA1阳性肿瘤细胞株的建立
- 2004年
- 目的:建立表达Epstein-Barr(EB)病毒核抗原-1(EBNA1)的肿瘤细胞株,用于EB病毒相关肿瘤的研究。方法:将1 200 bp的EBNA1基因片段插入真核细胞表达载体pcDNA3中,使用脂质体介导pcDNA3/EBNA1质粒进入人鼻咽癌CNE2细胞和人宫颈癌Hela细胞,通过G418进行阳性克隆的筛选,PCR、RT-PCR进行鉴定。结果:成功建立EBNA1基因阳性的鼻咽癌和宫颈癌肿瘤细胞株,经PCR、RT-PCR检测证明两种转基因细胞株稳定表达EBNA1。结论:EBNA1阳性肿瘤细胞株的建立,为体外进行EB病毒相关肿瘤的研究提供细胞模型。
- 张丽娅廖志勇车小燕温坤潘玉先
- 关键词：EBNA1肿瘤细胞株EB病毒
- 严重急性呼吸综合征患者核壳蛋白和刺突蛋白S1区的特异性抗体研究被引量：3
- 2005年
- 目的 研究严重急性呼吸综合征(SARS)患者血清中抗SARS冠状病毒(SARS CoV)核壳蛋白(N)及刺突蛋白(S)S1区特异性抗体的产生规律,评价这两种蛋白在SARS诊断研究中的作用。方法 采用ELISA法检测86例确诊SARS患者血清中针对N和S1蛋白IgG(N- IgG和S1 -IgG),并与SARS- CoVIgG水平进行比较。结果 两种蛋白的特异性抗体的阳性率均随着病程的延长而增高。N -IgG在发病第1周检出阳性率为14% (6 /44),第2周为56% (10 /18),第3周达到100% (24 /24);S1- IgG第1周检出阳性率为5% ( 2 /44 ),第2周为39% ( 7 /18 ),第3周阳性率达到83% ( 20 /24)。两种蛋白抗体的检测结果分别与SARS- CoVIgG结果比较,检测符合率分别为88% (76 /86)和83% (71 /86 )。结合免疫印迹和ELISA两种方法检出正常人群SARS CoVN -IgG阳性率为1. 88%(14 /745)。结论 SARS -CoVN和S1重组蛋白对于SARS诊断试剂的研究具有重要价值。
- 梅亚波王压娣廖志勇郝卫车小燕
- 关键词：SAPS刺突蛋白核壳蛋白确诊
- 人冠状病毒SARS-CoV、229E和OC43核衣壳(N)蛋白单克隆抗体的制备及3株人冠状病毒N蛋白的抗原相关性观察被引量：2
- 2006年
- 目的通过制备和鉴定人冠状病毒SARS-CoV、229E和OC43核衣壳(N)蛋白单克隆抗体(mAb),观察3株人冠状病毒的N蛋白抗原相关性。方法分别用基因重组SARS-CoV、229E和OC43N蛋白免疫BALB/c小鼠,制备mAb,并采用ELISA间接法、免疫印迹和免疫荧光进行筛选和鉴定,同时用mAb分析3株人冠状病毒N蛋白之间的免疫交叉反应。结果获得多株抗SARS-CoV、229E和OC43 N蛋白mAb杂交瘤细胞株,ELISA间接法、免疫印迹和免疫荧光结果均显示,所有的mAb仅与各自病毒的N蛋白特异性反应,而在3株人冠状病毒N蛋白抗原之间不产生免疫交叉反应。结论获得的特异性抗人冠状病毒N蛋白mAb为进一步研究3株人冠状病毒的抗原决定簇相关性奠定了基础。
- 丘立文王压娣廖志勇温坤车小燕
- 关键词：单克隆抗体冠状病毒核衣壳蛋白抗原性
- 人冠状病毒229E、OC43与SARS-CoV血清学相关性的研究被引量：5
- 2006年
- 目的检测正常人和SARS患者血清中3种人冠状病毒(229E、OC43和SARS-CoV)特异性抗体,分析3种冠状病毒血清学相关性。方法采用免疫印迹、免疫荧光和ELISA方法检测100例健康献血员、34例SARS患者恢复期以及11例SARS患者双份血清中229E、OC43和SARS-CoV 3种冠状病毒核衣壳(N)蛋白抗体。结果用免疫荧光方法检测100例健康献血员血清中229E、OCA3和SARS-CoV IgG阳性率分别为98％、100％和1％,34例SARS患者恢复期血清中3种冠状病毒IgG的阳性率均为100％;免疫印迹检测100例健康献血员血清中229E、OC43和SARS-CoV N蛋白IgG阳性率分别97％、99％和2％,34例SARS患者恢复期血清中229E、OC43和SARS-CoV N蛋白IgG阳性率分别97%、100％和100%;11例SARS患者的急性期和恢复期双份血清中,免疫荧光检测有5例出现229E IgG滴度4倍或以上升高,10例出现OC43 IgG滴度4倍或以上升高,ELISA检测2例出现229E N蛋白IgG滴度4倍以上升高,没有一例出现OCA3 N蛋白抗体滴度升高。结论正常人群中普遍存在229E和OC43两种人冠状病毒抗体,SARS-CoV感染者存在对人冠状病毒229E和OC43血清学交叉反应,提示核衣壳蛋白不是引起血清学交叉反应的主要抗原,结果对研究SARS溯源有重要意义。
- 王压娣丘立文廖志勇梅亚波车小燕
- 关键词：冠状病毒SARS-COV血清学
