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张乐翠
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1
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供职机构:
中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
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艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项
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相关领域:
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合作作者
徐鹏卫
中国疾病预防控制中心病毒病预防...
姚立红
中国疾病预防控制中心病毒病预防...
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中国疾病预防控制中心病毒病预防...
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2013
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H1N1亚型流感病毒NA基因在昆虫杆状病毒系统中的表达及鉴定
2013年
目的构建含有H1N1亚型流感病毒NA基因的重组杆状病毒。方法用PCR方法扩增甲型H1N1亚型流感病毒(A/PR8/34)全长神经氨酸酶基因,并将其连接于pFastBacdual载体,构建杆状病毒转移载体pFBD-NA。转化含有Bacmld的DHl0B感受态细胞后,获得重组穿梭载体rBacmid—NA。将其转染昆虫细胞sf9,获得重组病毒rBac—NA。提取重组杆状病毒rBac—NA的DNA并使用PCR方法检测;采用间接免疫荧光,SDS-PAGE,WesternBlot鉴定以及ELISA方法检测所表达的NA蛋白。结果经PCR鉴定所构建质粒rBacmid—NA正确;使用间接免疫荧光检测可见特异性绿色荧光位于感染细胞的表面,WesternBolt检测可与小鼠抗PR8株多克隆抗体和兔抗甲型流感病毒NA多克隆抗体发生特异性免疫反应;经ELISA检测,NA蛋白可被鼠抗流感病毒(PR8)多克隆抗体特异性识别。结论上述结果证明,我们获得了表达流感病毒NA蛋白的重组杆状病毒,为进一步研究NA蛋白的功能和新型流感疫苗的开发奠定了基础。
姚立红
付金奇
陈爱珺
刘晓宇
徐鹏卫
郭建强
张乐翠
关键词:
正黏病毒科
神经氨酸酶
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