王慧萍
- 作品数：41 被引量：54H指数：4
- 供职机构：上海市第一人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划山西省科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 超声辐照微泡增强病毒载体转染的细胞内吞行为研究
- 2015年
- 目的探索超声辐照微泡介导腺相关病毒（AAV）对不同细胞的转染和细胞内吞活动。方法以不同梯度浓度的携增强型绿色荧光基因的重组腺相关病毒2型（rAAV2-EGFP）转染人宫颈癌细胞（HeLa）和小鼠成纤维细胞（NIH／3T3）细胞，分别获得最佳可提高基础浓度。以此浓度，超声辐照微泡介导rAAV2-EGFP转染HeLa和NIH／3T3细胞后48h荧光显微镜观察和流式细胞仪检测EGFP基因转染效率，并采用CCK-8检测其安全性。超声辐照微泡介导AAV转染后45min，采用免疫荧光的方法共聚焦显微镜和透射电镜观察细胞膜内网格蛋白包裹的内吞泡的数量和分布。结果rAAV2-EGFP转染HeLa和NIH／3T3细胞的最佳可提高浓度分别为2000v．g．／cell和10000v．g．／cell。超声辐照微泡可显著提高rAAV2-EGFP对HeLa和NIH／3T3细胞的转染效率（P〈0．01），而细胞活性无显著下降（P〉0．05）。共聚焦显微镜和电镜显示，超声辐照微泡介导后，细胞膜内侧面网格蛋白包裹的内吞泡明显增多。结论超声辐照微泡可提高有赖于细胞转运的AAV病毒颗粒对两种不同细胞的基因转染，激活细胞内吞活动可能是超声辐照微泡促进AAV转运的机制之一。
- 金利芳李凡杜联芳王慧萍史秋生张会萍蔡应娱秦鹏
- 关键词：微气泡腺相关病毒转染细胞内吞
- Neuronatin对人视网膜色素上皮细胞增殖迁移的影响
- 2014年
- 目的:研究胚胎时期表达部位广泛、丰度高,而成年后分化表达的印记基因Neuronatin(Nnat)的两种剪接形式Nnatα和Nnatβ对人视网膜色素上皮细胞(RPE)增殖、迁移的影响。方法:构建Nnatα、β两种剪接形式的表达质粒,转染RPE获得表达该基因的稳定表达细胞株;CCK-8实验检测稳定表达细胞株的增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,细胞划痕实验检测其迁移能力。结果:成功构建了Nnatα和Nnatβ表达质粒,并获得了Nnatα和Nnatβ基因稳定表达PRE细胞株。CCK-8实验结果显示cNNATα组与对照组相比较,增值率为23.33%(P<0.05),cNNATβ组相较于对照组无显著性差异,细胞周期分析cNNATα组和cNNATβ组细胞在G2-S期的百分率分别为18.60%、11.11%,对照组细胞的为9.94%;相较于对照组,cNNATα组的细胞迁移能力显著增强,cNNATβ组的细胞迁移能力微弱增强。结论:Nnatα对RPE有一定的增殖作用,其影响主要在S期;同时,Nnatα显著促进RPE细胞的迁移能力。
- 胡冉李惠明王慧萍韦芳王丰王荣花
- 关键词：人视网膜色素上皮细胞细胞增殖细胞迁移
- 一种介导基因转染的方法
- 本发明属生物医学及生物工程学领域，涉及有关基因治疗的基因运载体系技术。具体涉及一种介导基因转染的方法。本发明将超声靶向破坏微泡技术与腺相关病毒载体技术以合适的时间、方式条件相联合，实现优势互补，使目的基因更为安全高效进入...
- 杜联芳王慧萍李凡李红丽郑孝志伍瑛史秋生
- 文献传递
- 小干扰RNA抑制雄激素受体基因表达对人膀胱癌T24细胞增殖及凋亡的影响被引量：5
- 2009年
- 目的 观察小干扰RNA技术（siRNA）抑制雄激素受体（AR）基因的表达对人膀胱癌T24细胞增殖及凋亡的影响。方法化学合成针对AR的siRNA，用脂质体转染T24细胞。采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Westernblot检测ARmRNA和蛋白的变化。转染细胞48h后用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞体外增殖活性的变化，流式细胞术检测细胞的凋亡状况。结果成功的转染T24细胞，实时荧光定量RT—PCR筛选出一条ARmRNA抑制效率最高的siRNA，行Westernblot检测可抑制AR蛋白表达至70．3％。转染细胞48h后，T24细胞增殖活性抑制率达到（25．9±5．4）％，细胞凋亡率达到21．61％。结论应用siRNA干扰技术能有效的抑制AR基因的表达，同时可抑制人膀胱癌T24细胞的体外增殖活性及促进其凋亡的发生。
- 吴吉涛韩邦旻赵福军王慧萍李惠明卓见韦芳夏术阶
- 关键词：雄激素受体脱噬作用
- 超声辐照声诺维与重组腺相关病毒经不同途径转染大鼠视网膜的实验研究被引量：2
- 2010年
- 目的 探讨超声辐照微泡造影剂声诺维（SonoVue）能否增强rAAV2-EGFP转染视网膜的效率.方法 62只Wistar大鼠进行玻璃体腔（10只）及视网膜下（52只）注射.实验分组：病毒＋生理盐水、病毒＋微泡、病毒＋生理盐水＋超声辐照和病毒＋微泡＋超卢辐照.第4、7、35、49、120 d分别用荧光体视镜观察,利用软件进行定量分析,并进行组织切片光镜检查.结果 玻璃体腔注射组持续观察2个月未见荧光;视网膜下注射组的超声辐照微泡组在第4、7、35 d较其他组转染效率高,超声辐照微泡造影剂对眼底组织无明显损伤.结论 超声辐照SonoVue可在体内促进rAAV2-EGFP转染大鼠视网膜.
- 李红丽杜联芳郑孝志王慧萍钱锦王丰李惠明
- 关键词：超声疗法视网膜转染腺病毒科
- 一种受转录和转录后双调控的溶瘤腺病毒及其构建方法
- 本发明属生物医学领域，涉及溶瘤腺病毒，具体涉及一种受组织或细胞特异性启动子(转录水平)和microRNA(转录后水平)双调控的新型溶瘤腺病毒及其构建方法，构建的双调控溶瘤腺病毒比仅受组织或细胞特异性启动子调控的溶瘤腺病毒...
- 王慧萍韦芳王荣花
- 文献传递
- 肝癌选择性溶瘤腺病毒的构建及其体外抑瘤作用被引量：1
- 2009年
- 目的:构建由AFP基因增强子-启动子调控,并携带自杀基因TK的新型条件复制型腺病毒载体,观察该载体的选择复制能力、溶瘤作用及其与前药GCV联合处理对肝癌细胞的杀伤作用。方法:以HepG2基因组DNA为模板,PCR扩增AFP基因启动子(AFPp)和增强子(AFPe),构建表达质粒pAFPp-EGFPluc和pAFPep-EGFPluc,再构建由AFPep调控E1A表达、并携带TK基因的穿梭质粒pDC311-AFPep-E1A/CMV-TK,利用AdMax系统包装腺病毒Ad.AFPep-E1A/CMV-TK;利用Western blotting、病毒增殖测试、细胞病变效应实验、病毒联合前药GCV对肝癌细胞的杀伤实验等鉴定病毒的复制能力、溶瘤作用和对肝癌细胞的杀伤作用。结果:成功构建的腺病毒载体Ad.AFPep-E1A/CMV-TK在AFP阳性细胞中选择性复制,病毒自身具有一定的溶瘤作用;该病毒载体联合GCV前药系统处理肝癌细胞后,AFP阳性肝癌HepG2细胞和Hep3B细胞的存活率分别为(10.35±1.07)%、(15.49±5.80)%,AFP阴性的张氏肝细胞和人肺癌NCIH460细胞的存活率分别为(73.55±4.36)%、(74.54±9.89)%(P<0.01)。结论:构建的新型溶瘤腺病毒载体具有选择性杀伤肝癌细胞的能力,在肝癌治疗方面有良好的应用前景。
- 傅强王慧萍韦芳李慧明陈霞芳王煜非黄倩
- 关键词：肝肿瘤
- 一种受转录和转录后双调控的溶瘤腺病毒及其构建方法
- 本发明属生物医学领域，涉及溶瘤腺病毒，具体涉及一种受组织或细胞特异性启动子(转录水平)和microRNA(转录后水平)双调控的新型溶瘤腺病毒及其构建方法，构建的双调控溶瘤腺病毒比仅受组织或细胞特异性启动子调控的溶瘤腺病毒...
- 王慧萍韦芳王荣花
- 文献传递
- 超声微泡造影剂介导pEGFP-N1转染小鼠角膜的实验研究被引量：3
- 2008年
- 目的探讨微泡造影剂声诺维联合超声介导绿色荧光蛋白质粒转染小鼠角膜的转染效率和安全性。方法小鼠眼前房分别注射生理盐水、质粒＋生理盐水、质粒＋造影剂、脂质体＋质粒等，以50Hz，2W／cm。的脉冲波超声辐照质粒＋生理盐水和质粒＋造影剂眼10min。术后第1d、第3d、第7d、第14d和第21d荧光体视镜观察眼表EGFP表达出现情况，冰冻切片荧光显微镜观察阳性细胞的分布，病理切片观察组织有无损伤。结果造影剂联合超声辐照组小鼠眼表出现绿色荧光蛋白的弥漫性表达，明显高于单纯超声辐照组和脂质体转染组，其余对照各组眼表均未见绿色荧光。第3d时的病理切片各组均无异常。结论声诺维联合超声辐照在体能安全、有效地介导基因转染眼组织。
- 伍瑛杜联芳陈永东王慧萍王丰
- 关键词：造影剂基因转移技术角膜
- 应用组织特异微RNA构建更加安全的腺病毒
- 2015年
- 溶瘤腺病毒是目前最有潜力的肿瘤治疗病毒载体之一,但其在应用过程中会产生比较严重的毒副作用,特别是肝脏毒性。为了更好地针对组织靶标,需要制备更加安全、有效的溶瘤腺病毒。近年来,科学家使用微RNA(miRNA)调控基因表达系统,将若干拷贝数的组织特异性miRNAs对应的靶序列加入到腺病毒复制早期必需基因E1基因表达盒的3'非翻译区,在转录后水平调控病毒复制。这种方法能有效消除腺病毒的毒副作用,进一步提高腺病毒使用的安全性。
- 王荣花王慧萍
- 关键词：肿瘤腺病毒
