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中国河南两株庚型肝炎病毒(HGV)NS5区部分cDNA的克隆与序列分析: 1998年; 通过逆转录－聚合酶链反应从我国河南省２例重叠感染ＨＣＶ或ＨＢＶ／ＨＤＶ的献血员中，分离到ＨＧＶＮＳ５区的部分ｃＤＮＡ，对其进行序列分析比较，结果表明：河南株ＨＧＶＮＳ５区核苷酸与两株中国ＨＧＶ株的同源性（＞９１．９％）高于国外代表株（８８．５％－９０．６％），但由核苷酸推导的氨基酸的同源性都无明显的地区性区别。ＨＧＶＮＳ５区氨基酸序列较保守（同源性＞９１％），缺乏明显高变区。中国４株ＨＧＶ在７３８４位发生了由Ｃ→Ｔ的变异，从而导致一个共同的保守位点的产生（由Ｆ→Ａ）。重叠感染其他肝炎病毒时。; 谭文杰陈刚夏宁邵黄鹤丛郁苗季詹美云; 关键词：庚型肝炎病毒非结构基因

一种同时检测丙型与庚型肝炎病毒的逆转录-巢式聚合酶链反应方法被引量：2: 1998年; 目的庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）同属黄病毒科，且传播途径相似，重叠感染率高，本研究旨在建立一种同时检测ＨＧＶ与ＨＣＶ感染的方法。方法根据ＨＣＶ与ＨＧＶ的基因序列分别选取５’－ＵＴＲ（ＨＣＶ）与ＮＳ３（ＨＧＶ）的两套引物，在同一管内进行逆转录－巢式聚合酶链反应，并初步应用于１５３例标本。结果该方法能同时检出ＨＧＶ与ＨＣＶ感染，扩增片段大小与设计相符。结论该方法简便特异。; 谭文杰夏宁邵丛郁陈刚陈刚苗季伊瑶; 关键词：丙型肝炎病毒庚型肝炎病毒聚合酶链反应

中国庚型肝炎病毒河南株非结构基因(NS)3区cDNA的克隆及序列分析: 1998年; 目的为了研究中国庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）非结构（ＮＳ３）区基因结构特征。方法利用逆转录半巢式聚合酶链反应从河南１份ＨＧＶＲＮＡ阳性血清获得覆盖ＨＧＶＮＳ３全长ｃＤＮＡ的４个片段，并克隆到ｐｃＤＮＡⅡ载体中，采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧末端终止法测定全部ｃＤＮＡ序列。结果发现克隆到的包括ＨＧＶＮＳ３区在内的ｃＤＮＡ序列长度为２１３７个核苷酸，编码７１１个氨基酸。与国内外已测定的５侏全序列的相应序列进行同源性比较，其核苷酸同源性在８５７％～９３８％之间，根据核苷酸序列推导的氨基酸序列的同源性为９６１％～９７３％，３株中国ＨＧＶＮＳ３区氨基酸存在３个共同变异位点，此外在河南株ＮＳ３区还发现了一个与其他５株全序列共同的糖基化位点。结论河南株ＨＧＶＮＳ３区的核苷酸及氨基酸序列相对比较保守，其基因特征的阐明为ＮＳ３区基因的生物学功能研究及ＨＧＶ诊断试剂的研制提供了基础。; 陈刚谭文杰王淑萍詹美云; 关键词：庚型肝炎病毒 CDNA克隆病毒基因

用逆转录-套式聚合酶链反应检测我国不同临床型肝炎/肝病患者中庚型肝炎病毒感染被引量：4: 1998年; 目的为了研究庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）在我国的感染状况。方法根据已发表的ＨＧＶ的５’端非编码区（５’－ＵＴＲ区）及螺旋酶区（ＮＳ３区）两段高度保守的基因序列分别设计两套引物，用逆转录－套式聚合酶链式反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）检测ＨＧＶＲＮＡ。结果从北京、秦皇岛、河南等地采集各种肝病患者及职业献血员血清３５４份，ＨＧＶＲＮＡ阳性７９份，阳性率为２２．３％。其中已确定的临床型肝炎／肝病患者２５４例，ＨＧＶＲＮＡ阳性者为５０例，阳性率为１９．６％。原因不明的或非甲～戊型肝炎患者４３例，ＨＧＶＲＮＡ阳性者为１３例，阳性率为３０．２％。丙型肝炎阳性的职业献血员５７例，ＨＧＶＲＮＡ阳性者为１６例，阳性率为３０．２％。结论提示ＨＧＶ感染在我国多种人群中普遍存在，它不仅可能是引起非甲～戊型肝炎的重要病原之一。; 丛郁谭文杰陈刚苗季张文英田瑞光詹美云; 关键词：庚型肝炎病毒 RNA 聚合酶链反应

利用穿梭质粒快速构建含乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因的重组杆状病毒被引量：3: 1998年; 目的应用新型杆状病毒表达系统快速构建含有ＨＢｓＡｇ基因的重组杆状病毒，高效表达ＨＢｓＡｇ，为ＨＢＶ诊断试剂、疫苗及治疗研究提供依据。方法构建含有ＨＢｓＡｇ基因的供体质粒ｐＦＢ－ＢＳ，转化Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ杆状病毒表达试剂盒中的ＤＨ１０Ｂａｃ致敏菌，利用其含有的细菌Ｔｎ７转座系统将ＨＢｓＡｇ基因重组至穿梭质粒Ｂａｃｍｉｄ上，快速筛选出含有ＨＢｓＡｇ基因的重组杆状病毒。结果此重组病毒能在昆虫细胞中表达出有生物学活性的ＨＢｓＡｇ，表达产物主要集中在细胞内，ＥＬＩＳＡ滴度为１：２×１０４，产量可以达到２μｇ／１０６细胞。; 苗季丛旭谭文杰丛郁陈刚詹美云; 关键词：杆状病毒乙型肝炎病毒表面抗原

丙型肝炎病毒核壳蛋白在转基因小鼠中的表达及与Fas抗原关系的初步研究被引量：4: 1997年; 将中国人丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）分离株的５’－非编码区和结构基因（５ＵＴＲ＋Ｃ＋Ｅ１＋Ｅ２）区基因插入到ｐｃＤＮＡ３载体中构成表达质粒，通过显微注射法将此质粒注射入Ｆ１代杂交鼠（Ｃ５７ＢＬ／６ＸＩＣＲ）受精卵，并植入假孕母鼠输卵管中，经筛选获得整合有目的基因的转基因小鼠系。免疫组化研究表明，ＨＣＶ核壳蛋白在转基因小鼠各组织中皆有表达，多呈核型染色，心肌细胞中可见浆型。核壳蛋白在各组织中的表达水平；心＞肺＞肾＞肝，同时在转基因小鼠心、肾、肝中检出Ｆａｓ抗原的表达，其表达水平与核壳蛋白的表达呈正相关关系。提示ＨＣＶ核壳蛋白的表达可引起Ｆａｓ抗原的表达。; 谭文杰郎振为丛郁陈刚陈刚詹美云; 关键词：丙型肝炎病毒转基因小鼠丙型肝炎

中国株HGV NS3 区基因的原核表达及其产物的抗原性分析被引量：1: 1999年; 目的研究ＨＧＶＮＳ３区基因产物的抗原性，并探讨ＮＳ３蛋白在血清学检测中的应用。方法将中国株ＨＧＶＮＥ３区的３个基因片段分别克隆到ｐＲＳＥＴＢ和ｐＲＳＥＴＣ质粒载体中，构建成原核表达载体。ＩＰＴＧ诱导下，在大肠杆菌ＢＬ２１中高效表达，获得３个重组蛋白，用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和ＥＬＩＳＡ法分别对表达产物进行分析。结果所构建的表达载体均得到高效表达，得到的重组蛋白ＰＡ、Ｐ３和Ｐ４的分子量分别为４２０００，３００００和２４０００，在Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和ＥＬＩＳＡ反应中均可被ＨＧＶ阳性血清识别，其中ＨＧＶＮＳ３区Ｎ端的基因产物抗原性较强。结论中国株ＨＧＶＮＳ３区的Ｎ端存在优势的抗原决定簇，其基因产物有较好的抗原性。; 陈刚毕胜利詹美云; 关键词：GBV-C/HGV 抗原性分析

中国株丙型肝炎病毒(HCV)结构区蛋白在昆虫细胞中的表达及加工被引量：10: 1998年; 利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达了完整的中国河北株丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）结构蛋白。免疫印迹实验结果显示，表达产物中有一系列分子量不同、可以与ＨＣＶ抗体阳性病人血清反应的蛋白，表明结构蛋白被宿主细胞蛋白酶切割与加工，相应分别为２０ｋＤ的核心蛋白、３２ｋＤ糖基化的Ｅ１蛋白、４０ｋＤ的未糖化的Ｅ２蛋白和７０ｋＤ糖基化的Ｅ２蛋白，另有８０ｋＤ及１００ｋＤ的两组前体蛋白。利用表达产物检测慢性ＨＣＶ感染者血清，发现Ｅ２抗体检出率很高，而其中一部分核心抗体为阴性。; 苗季谭文杰丛旭丛郁陈刚毕胜利詹美云; 关键词：丙型肝炎病毒结构基因杆状病毒

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陈刚

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