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川芎咖啡酸-O-甲基转移酶基因的克隆及序列分析被引量：3: 2016年; 克隆川芎(Ligusticum chuanxiong Hort)咖啡酸-O-甲基转移酶(COMT)基因并做序列分析。采用RT-PCR方法,以新鲜的川芎嫩叶c DNA为模板,克隆出川芎COMT基因的c DNA序列。此基因全长1328 bp,编码360个氨基酸。将得到的序列提交Gen Bank,序列号为KU942388。此川芎COMT具有植物O-甲基转移酶家族特征性的功能结构域,与中粒咖啡、牵牛花COMT的氨基酸序列同源性分别为70%、69%,推测其能够催化咖啡酸的氧甲基化反应。该川芎COMT基因的成功克隆为下一步活性验证及利用生物技术来生产阿魏酸奠定坚实基础。; 朱建全向缅李洋洋俞继华张赶王万军廖海周嘉裕; 关键词：川芎克隆

决明丙二酰CoA:ACP转酰基酶基因的克隆及序列分析被引量：2: 2015年; [目的]克隆决明丙二酰Co A:ACP转酰基酶(MCAT)基因并做序列分析。[方法]采用RACE法从c DNA中扩增出决明丙二酰Co A:ACP转酰基酶(MCAT)的CDS全长序列,推测出MCAT基因编码的氨基酸序列并进行序列分析。[结果]分析结果显示MCAT的CDS全长1 253bp,编码405个氨基酸。通过序列比对分析发现决明MCAT蛋白包含一个酰基转移酶超家族结构域,并且发现了一段高度保守的七肽模序。[结论]获得了决明MCAT的CDS全长,其编码的蛋白可能催化丙二酰Co A的转酰基反应,为决明脂肪酸的合成通路的阐明以及后期的决明脂肪酸的基因工程研究打下了坚实的基础。; 张赶刘祖碧李娟娟俞继华李洋洋廖海周嘉裕谭睿; 关键词：决明

一种酶法合成阿魏酸的方法: 本发明公开了一种酶法合成阿魏酸的方法，将S-腺苷甲硫氨酸(SAM)上的甲基转移至咖啡酸上，最终形成产物阿魏酸，包括以下步骤:a)通过大肠杆菌的发酵高效表达川芎咖啡酸-O甲基转移酶COMT，通过离心收集菌体，用Tris-H...; 廖海周嘉裕张赶李娟娟俞继华李洋洋黄新河; 文献传递

川芎咖啡酸-3-O-甲基转移酶的原核表达与条件优化被引量：2: 2016年; 以川芎咖啡酸-3-O-甲基转移酶基因(LCCOMT)为表达对象,将含有6*His标签的LCCOMT基因连接pET28a表达载体后转化大肠杆菌BL21,采用原核表达的方法,优化了LCCOMT基因的表达条件。结果表明:当诱导时间为4h,IPTG终浓度为2.0mmol·L-1,诱导温度为37℃时,重组LCCOMT蛋白的表达量达到最大。溶解性检测结果表明,LCCOMT重组蛋白以可溶性蛋白的形式存在,占总蛋白的9%,该试验可为LCCOMT的大规模表达纯化奠定基础。; 宋婧朱建全张泉宝张赶周嘉裕; 关键词：川芎原核表达

川芎咖啡酸-3-O-甲基转移酶的同源建模和定点突变被引量：2: 2016年; 目的构建川芎咖啡酸-3-O-甲基转移酶(Ligusticum chuanxiong caffeic acid-3-O-methyltransferase,LCCOMT)的三维模型,并利用定点突变对模型进行验证。方法利用同源建模构建LCCOMT的初始三维模型;对初始三维模型进行动力学优化;将优化后的模型对接咖啡酸,预测LCCOMT的活性位点;对预测的活性位点展开定点突变,检测突变型蛋白的生物活性。结果 LCCOMT的三维模型能够与咖啡酸成功对接,His268残基可能是LCCOMT的活性位点,推测其能够与咖啡酸3-OH形成氢键。H268N与H268Q2种突变酶分别丧失94.85%和95.28%的催促活性。结论同源建模能够准确预测LCCOMT的三维模型。His268为LCCOMT的关键氨基酸残基,其作用可能是作为共轭碱,参与咖啡酸3-OH的去质子化反应。; 俞继华李洋洋宋婧李娟娟张赶朱建全向缅王万军廖海周嘉裕; 关键词：川芎同源建模

川芎COMT基因序列的克隆、分析、表达及功能鉴定: 川芎（Ligusticum chuanxiong Hort）为我国中医传统药物中的一种常用药物，有活血行气、祛风止痛的功效。其中阿魏酸为其指标成分和主要活性成分。阿魏酸的生物合成途径中以咖啡酸甲基化生成阿魏酸为主要调控步...; 张赶; 关键词：川芎阿魏酸克隆技术; 文献传递

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