王丽
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 供职机构：哈尔滨医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肺炎克雷伯菌 ampG 基因缺失突变株的构建
- 2015年
- 目的 利用同源重组技术构建肺炎克雷伯菌ampG基因缺失突变株,初步探讨ampG基因缺失对肺炎克雷伯菌AmpC酶诱导表达的影响. 方法 PCR分别扩增实验菌株ampG上下游同源臂片段,再利用重叠延伸PCR（gene splicing by overlap extension PCR ,SOE-PCR）技术获得ampG基因上下游同源臂融合片段,酶切后克隆至温敏性自杀载体pKO3-km上,构建pKO3-km-ΔampG重组质粒,电转化至肺炎克雷伯菌Kp1和Kp NTUH-K2044 菌株中,通过同源重组技术,利用pKO3-km的温敏特点,筛选出肺炎克雷伯菌ampG基因缺失的突变株;将克隆质粒pACYC184-ampCR分别导入Kp NTUH-K2044的野生型及其ampG基因缺失菌株中,使其获得AmpC酶基因;采用纸片扩散法,以头孢西丁为诱导剂,观察ampG基因缺失前后对肺炎克雷伯菌AmpC酶诱导表达的影响. 结果 成功构建pKO3-km-ΔampG重组质粒,经PCR及DNA测序证实获得肺炎克雷伯菌ampG基因缺失突变株,与野生型相比,Kp1菌株ampG基因敲除后AmpC酶诱导表型消失,而在获得了外源性AmpC酶基因后, Kp NTUH-K2044菌株AmpC酶诱导表型阳性,其相应的ampG基因缺失株AmpC酶诱导表型阴性.结论 成功构建肺炎克雷伯菌ampG基因缺失突变株,ampG基因缺失后肺炎克雷伯菌AmpC酶不能诱导表达.
- 王丽多丽波李桂玲张和光栾英陈淑娟
- 关键词：肺炎克雷伯菌同源重组AMPC酶
- 基因敲除技术在肺炎克雷伯菌基因功能研究中的应用进展被引量：5
- 2015年
- 基因敲除技术是研究基因功能的重要手段,通过构建基因缺失的突变体,检测突变体表型的变化,对于研究肺炎克雷伯菌的功能基因极为重要。目前用于肺炎克雷伯菌基因敲除的方法主要有随机插入突变和同源基因重组两种,本文就这两种方法在肺炎克雷伯菌基因功能研究中的应用进展作一综述。
- 王丽多丽波
- 关键词：基因敲除插入突变同源重组肺炎克雷伯菌
