张耀方
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 供职机构：天津农学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点实验室开放基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 一种胰高血糖素样肽-1的重组表达方法
- 一种胰高血糖素样肽‑1的重组表达方法，包括以下步骤1)构建一种含有编码小泛素相关修饰物的DNA序列和编码重组胰高血糖素样多肽‑1的DNA序列的融合基因SUMO‑rolGLP‑1；2)构建一种包括融合基因SUMO‑rolG...
- 张耀方王英超李涛李天俊许艳玲
- 文献传递
- 双功能促胰岛素水蛭素(5rolGLP-HV)的构建及功能分析
- 2014年
- 采用分子克隆方法获得5拷贝口服长效促胰岛素多肽(rolGLP-1)和水蛭素(rHV)融合基因促胰岛素水蛭素(5rolGLP-HV),并将该基因克隆至pET22b(+)表达载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),实现了高效表达.表达产物经SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定后用Ni-NTA亲和层析柱纯化,得到高纯度的5rolGLP-HV.用STZ诱导Ⅱ型糖尿病小鼠和血栓模型鼠进行药物功能分析,结果表明,5rolGLP-HV有较好的降糖和抗血栓效果.
- 张耀方马百成屠培培李宠马志华姬艳丽董震马超郝军凤李晓丹王宇李明刚
- 关键词：血栓纯化功能分析
- 实验性2型糖尿病小鼠肝脏组蛋白H3表观修饰的变化及其意义
- 2015年
- 目的:研究肝脏组蛋白H3表观修饰的变化在2型糖尿病小鼠发病过程中的作用,探讨其临床意义。方法:30只C57BL/6J小鼠分为正常组、高脂高糖组和糖尿病组,正常组和高脂高糖组小鼠分别给予正常饲料和高脂高糖饲料,糖尿病模型采用高脂高糖饲料联合注射链脲佐菌素(STZ)方法构建。采用HE染色、免疫印迹法、实时定量PCR和ChIP技术分别检测小鼠肝脏病理学变化、肝脏中总组蛋白H3的修饰状况及与糖代谢相关基因丙酮酸激酶(Pklr)、葡萄糖转运蛋白2(Glut2)、葡糖糖激酶(Gck)、过氧化物酶体增生物激活受体γ辅助活化因子1(Ppargc1a)和胰岛素受体(Insr)的表达水平和基因启动子区组蛋白的修饰变化。结果:糖尿病组小鼠肝脏病理学(HE染色)和组蛋白修饰模式均发生了明显变化。与正常组比较,高脂高糖组小鼠H3K23的乙酰化下降(P<0.01),H3K9Ac和H3K9Me2修饰水平上调(P<0.01),H3K4Me保持不变(P>0.05),糖代谢相关基因Pklr、Glut2和Gck的表达水平升高(P<0.01);糖尿病组小鼠H3K23Ac和H3K9Ac修饰水平下降(P<0.05或P<0.01),H3K9Me2和H3K4Me的修饰水平升高(P<0.01),糖代谢相关基因Pklr、Glut2、Gck、Ppargc1a和Insr表达水平明显下调(P<0.05或P<0.01)。Pklr、Glut2启动子区H3K23Ac、H3K9Ac、H3K9Me2和H3K4Me修饰水平变化与基因的表达水平变化相吻合。结论:肝脏组蛋白表观修饰变化可能参与了2型糖尿病的发生发展。
- 屠培培李晓丹马百成张耀方段会坤尼再中王海松姜苹哲李淼吴日李明刚
- 关键词：表观遗传学组蛋白H3丙酮酸激酶葡萄糖转运蛋白2
- SUMO-β-抑制蛋白2融合基因的克隆、表达与蛋白纯化被引量：1
- 2017年
- 2型糖尿病是一种常见的慢性疾病,其发生与胰岛素的耐受相关。β-抑制蛋白2(β-arrestin2)的缺失或功能紊乱,会导致胰岛素抵抗和2型糖尿病的发生。而使用β-arrestin2进行治疗可明显缓解葡萄糖不耐受及胰岛素抵抗。本研究通过重组PCR方法,将小分子泛素相关修饰物(small ubiquitin-related modifier,SUMO)与β-arrestin2基因融合,再将融合基因插入原核表达载体p ET22b中,成功构建了p ET22b-SUMO-β-arrestin2表达载体,将重组表达载体转入大肠杆菌Rosetta Blue(DE3)宿主细胞,使用IPTG在温度为20℃诱导表达,再将诱导表达后的蛋白经Ni-NTA进行纯化,成功获得SUMO-β-arrestin2蛋白,为后续β-arrestin2药效学的研究奠定基础。
- 张耀方许艳玲黄治强杜莉陈曦付裕李明刚
- 关键词：糖尿病纯化
