刘伟
- 作品数：11 被引量：34H指数：5
- 供职机构：上海市组织工程研究与开发中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划上海市重大科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学一般工业技术更多>>
- 成纤维细胞玻璃化保存的实验研究
- 成纤维细胞是构建组织工程化真皮的种子细胞,实现成纤维细胞的低温保存对成功保存组织工程化真皮有着重要的意义。本文采用不同组成及浓度的玻璃化溶液对成纤维细胞进行玻璃化低温保存实验,并考虑了离心次数对细胞存活率的影响。实验结果...
- 程启康王欣杨鹏飞华泽钊邓辰亮杨光辉崔磊刘伟曹谊林
- 文献传递
- 人肋软骨细胞体外培养中生长代谢及功能的变化被引量：5
- 2004年
- 目的 通过检测体外培养的人肋软骨细胞老化过程中Ⅰ、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖(aggrecan)的表达变化 ,为组织工程软骨构建的种子细胞选择适宜的回植时机。方法 取体外培养的P1 ～P5人肋软骨细胞 ,通过观察细胞形态 ,细胞增殖率 ,Alcianblue法定量检测每代Aggrecan中GAG含量 ,免疫组化蛋白水平观察Ⅰ、Ⅱ型胶原表达及RT PCR从mRNA水平分析Ⅰ、Ⅱ型胶原及Aggrecan基因表达量。结果 人肋软骨细胞从第 3代起逐渐向成纤维样细胞形态转换 ;每代软骨细胞Aggrecan中GAG含量随传代次数逐渐降低 ,第 3代后处于较低水平 ;Ⅰ、Ⅱ型胶原的表达在蛋白水平及mRNA水平基本一致 ,第 2代以前Ⅱ型胶原表达较强 ,Ⅰ型胶原表达较弱 ,之后随传代Ⅱ型胶原表达减弱 ,Ⅰ型胶原表达逐渐增强 ;而Aggrecan在第 3代以前表达较高 ,从第 4代后明显下降。结论 人软骨细胞体外培养老化过程中综合细胞扩增及细胞功能因素 ,第 2代的软骨细胞 (体外扩增约 18 32 6倍 )可作为构建人组织工程软骨的种子细胞。
- 张艳柴岗刘伟崔磊曹谊林
- 关键词：肋软骨体外培养组织工程软骨MRNA水平生长代谢
- 体外培养软骨细胞凋亡与caspase-3表达的实验研究被引量：6
- 2003年
- 目的 探讨软骨细胞体外培养过程中凋亡发生以及 caspase- 3的表达。 方法 采用 Annexin 和TU NEL 法检测第 1～ 4代软骨细胞在体外正常培养体系中第 3天和第 7天的凋亡率 ;RT- PCR和 Western blot分析caspase- 3表达水平 ;EL ISA检测 caspase- 3蛋白酶活性。 结果 第 1～ 4代软骨细胞在体外培养过程中均存在不同程度的凋亡现象 ,各代次软骨细胞第 7天的凋亡率 15 .7%± 0 .3% ,明显高于第 3天的 8.9%± 0 .6 % ,有统计学意义 (P<0 .0 1)。caspase- 3m RNA和蛋白质在整个培养过程中都有表达 ,随着时间延长表达上调 ,第 7天的表达水平高于第 3天。体外培养 7天后 caspase- 3被激活 ,可检测到分子量为 2 0 ku的裂解片段。caspase- 3蛋白酶活性随着培养时间延长也逐渐增高 ,与细胞凋亡程度基本一致。 结论 软骨细胞在体外培养过程中存在凋亡 ,caspase- 3参与了凋亡事件并发挥着重要作用。
- 肖娟曹谊林范华骅邹萍崔磊刘伟高峰陆华中
- 关键词：软骨细胞体外培养细胞凋亡
- 用PGA支架体外构建人口腔黏膜固有层的实验研究被引量：5
- 2004年
- 目的:探讨利用可吸收生物材料聚羟基乙酸(polyglycolicacids,PGA)和口腔黏膜成纤维细胞(oralfibroblast,OFC)在体外构建组织工程化口腔黏膜固有层的可能性。方法:取细胞经体外培养,扩增至第3代,与PGA混合培养,形成细胞—生物材料复合物,每2d换液一次。动态观察细胞形态和粘附生长状况,于体外培养1周左右,取组织作电镜观察、组织学和RT-PCR检测。结果:复合物体外培养6d,OFC粘附在生物支架上,沿PGA纤维纵轴方向向两极伸展,细胞分泌基质并形成拉网状结构。HE染色和Masson染色均提示胶原纤维形成,RT-PCR显示胶原成分主要为Ⅰ型胶原。结论:应用PGA支架可以在体外成功构建口腔黏膜固有层组织。
- 周曾同黄鹤李卿曹德君刘伟曹谊林
- 关键词：成纤维细胞聚羟基乙酸
- 降温过程中组织工程用真皮成纤维细胞膜水分渗透特性的实验研究被引量：1
- 2005年
- 在优化组织工程化真皮的低温保存程序时, 有必要了解体外培养的真皮成纤维细胞的低温保存特性, 如细胞膜的水分渗透系数和相应的表观活化能等. 以组织工程用真皮成纤维细胞为实验材料, 通过添加少量冰核细菌诱导形成胞外冰, 应用DSC对在降温速率为5℃·min-1的条件下细胞悬液样品在相变过程中释放的热流量进行了测量. 对所测得的热流曲线计算得出了降温过程中成纤维细胞体积随温度的变化趋势, 并以Karlsson提出的细胞水分渗透模型为理论基础, 对获得的细胞体积变化数据进行了非线性回归的最小二乘优化, 得出了细胞膜的水分渗透率: 参照温度下(0℃)细胞膜对水分的渗透系数Lpg = 5.87×104μm·min-1·Pa-1, 表观活化能ELP = 308.8 kJ·mol-1. 将上述参数代入水分渗透模型, 对在不同的降温速率下(0.01～50℃·min-1), 冻存过程中成纤维细胞的水分渗透情况进行了模拟, 预测水分渗透过程结束后细胞内未渗透水的数量及保存成纤维细胞时应采取的最佳降温速率.
- 王欣程启康高才杨鹏飞华泽钊邓辰亮杨光辉崔磊刘伟曹谊林赵廷昌孙福在
- 关键词：DSC成纤维细胞降温过程细胞膜工程用真皮
- 培养9天的组织工程化真皮低温保存的研究被引量：5
- 2003年
- 组织工程化真皮的低温保存是皮肤组织工程的重要组成部分 ,对皮肤组织库的建立有重要意义。以培养一定时间的组织工程化真皮为试材 ,以四唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率 ,辅以光学显微镜和扫描电镜观察分析 ,试验研究了低温保护剂预处理方式、降温程序及降温速率等条件对组织工程化真皮低温保存效果的影响。实验表明 :将组织工程化真皮置于 2 1mol/L的DMSO溶液中 ,在 4°C下处理 1 5min ,再只将组织工程化真皮转入低温保存袋中 ,迅速热封口 ,以 1°C/min速率降温且无恒温处理可获得较高的细胞存活率 ( 72 8%～ 78% ) 。
- 王欣华泽钊杨光辉崔磊刘伟曹谊林程启康
- 关键词：皮肤组织工程四唑盐比色法细胞存活率
- 口腔黏膜上皮细胞及成纤维细胞与PGA的生物相容性研究
- 2004年
- 目的 :观察口腔黏膜上皮细胞与成纤维细胞在聚羟基乙酸 (PGA)上的粘附生长情况 ,在体外形成活的黏膜样组织的能力。方法 :口腔黏膜上皮细胞无血清、无饲养层体外培养、扩增至第二代 ,与PGA混合培养形成细胞 -生物材料复合物 ;口腔黏膜成纤维细胞体外培养、扩增至第二代 ,与PGA混合培养形成细胞 -生物材料复合物 ;①光镜、扫描电镜下观察两种细胞分别与PGA的粘附生长情况 ;②用MTT法检测口腔黏膜上皮细胞及成纤维细胞在PGA上的增殖情况 ,绘制细胞生长曲线。结果 :口腔黏膜上皮细胞与成纤维细胞能够在PGA上粘附生长 ,其生长增殖能力优于平皿培养。结论 :PGA与口腔黏膜上皮细胞或成纤维细胞具有良好的生物相容性 ,其降解产物无毒 。
- 黄鹤周曾同杨光辉崔磊刘伟曹谊林
- 关键词：生物工程上皮细胞成纤维细胞MTT
- 成纤维细胞玻璃化保存的初步实验研究被引量：4
- 2004年
- 成纤维细胞是构建组织工程化真皮的种子细胞 ,实现成纤维细胞的低温保存对成功保存组织工程化真皮有着重要的意义。采用不同组成及浓度的玻璃化溶液对成纤维细胞进行玻璃化低温保存实验 ,并考虑了离心次数对细胞存活率的影响。实验结果表明 :玻璃化溶液的组成、浓度及复温后的离心次数等因素对细胞的存活率均有明显的影响。在实验条件下 ,采用组分配比为 5 4mol/LEG+1 4mol/LDMSO的玻璃化溶液对成纤维细胞进行玻璃化保存 ,复温后以 10 0 0r/min的转速离心 1次(5min)后 ,再以 80 0r/min的转速离心 4次 (每次 4min) ,可获得较高的细胞存活率 ,其值为87 1%。
- 程启康王欣杨鹏飞华泽钊邓辰亮杨光辉崔磊刘伟曹谊林
- 关键词：成纤维细胞
- DMSO浓度及降温速率对组织工程化真皮超低温保存效果的影响被引量：7
- 2003年
- 组织工程化真皮的超低温保存技术是皮肤组织工程的重要组成部分,对皮肤组织库的建立有重要意义。低温保存与低温保护剂的种类、浓度、降温复温程序及低温保护剂的添加与去除方式有着密切的关系。实验目的:研究DMSO浓度及降温速率对组织工程化真皮超低温保存效果的影响。实验方法:以培养一定时间的组织工程化真皮为试材,以不同浓度的DMSO溶液为低温保护液,以不同的降温速率降温保存,以四唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率,辅以光学显微镜和扫描电镜观察分析。实验表明:降温速率为1℃/min,DMSO浓度为1.4mol/L时可获得在实验范围内较高的细胞存活率,为75％,超低温保存后的扫描电镜照片表明其细胞形态最为接近新鲜状态,细胞与支架材料的黏附也很紧密,这与细胞存活率的研究结果有很好的相关性。
- 王欣华泽钊杨光辉崔磊刘伟曹谊林程启康
- 关键词：真皮超低温保存
- 成纤维细胞预处理过程及三种低温保存方法比较的实验研究
- 2004年
- 成纤维细胞是构建组织工程化真皮的种子细胞,实现成纤维细胞的低温保存对成功保存组织工程化真皮有着重要的意义。采用三种不同的低温保存方法对成纤维细胞进行低温保存实验;详细介绍这三种方法的操作过程;并从细胞存活率、降温过程中的温度变化情况、操作时所需仪器设备及所耗时间等方面对这三种方法进行了比较。同时研究了DMSO的浓度、预处理时间及预处理温度等因素对成纤维细胞存活率的影响。
- 程启康杨鹏飞王欣华泽钊邓辰亮杨光辉崔磊刘伟曹谊林
- 关键词：成纤维细胞种子细胞细胞存活率
