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裘玮: 作品数：10 被引量：15H指数：2; 供职机构：上海市第一人民医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划上海市自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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STAT3短发卡RNA表达载体对胰腺癌细胞增殖与凋亡的影响被引量：10: 2007年; 目的探讨信号转导与转录激活因子-3（signal transduction and activators of transcription，STAT3）短发卡RNA（short hairpin RNA，shRNA）表达载体对STAT3表达及胰腺癌细胞SW1990增殖和凋亡的影响。方法针对人STAT3的基因序列设计合成三对含有小发夹结构的寡核苷酸序列，将其连入pRNAT—U6．1／Neo质粒中，构建STAT3 shRNA表达载体，并转染SW1990细胞，RT—PCR和Western blot观察SW1990细胞STAT3 mRNA和蛋白表达的改变，噻唑蓝（MTF）检测细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞凋亡。结果三种STAT3 shRNA表达载体转染SW1990细胞后，STAT3 mRNA和蛋白的表达水平与未转染组相比均明显下降（P〈0．05），细胞增殖活性与未转染组相比显著降低（P〈0．05），而细胞凋亡率较未转染组显著升高（P〈0．05）。结论STAT3 shRNA表达载体能有效抑制STAT3的表达，且显著抑制人胰腺癌细胞增殖并促进凋亡；RNA干扰（RNA interference，RNAi）沉默STAT3的治疗策略可能为胰腺癌治疗提供新的思路。; 裘正军黄陈裘玮曹俊黄克俭张放朱麟江弢; 关键词：RNA干扰胰腺肿瘤 STAT3 凋亡

一种新的神经胶质瘤原位移植模型的建立: 2007年; 目的:建立一种新的可动态观察肿瘤细胞生长的大鼠神经胶质瘤原位移植瘤模型。方法:利用脂质体将含有强化绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)基因的真核表达质粒pEGFP-N1转染大鼠神经胶质瘤C6细胞,经G418筛选及亚克隆,获取稳定表达EGFP的细胞系C6-gfp。采用CCK-8试剂盒检测C6及C6-gfp细胞增殖情况;将C6-gfp细胞接种于Wistar大鼠颅内,通过B超、大体标本、荧光体视镜、H-E染色和免疫组化观察颅内成瘤情况及瘤组织中绿色荧光蛋白的表达。结果:流式细胞术分析体外培养的C6-gfp细胞97.7%产生绿色荧光;C6-gfp细胞与亲代C6细胞相比,生长曲线无明显不同(P>0.05)。C6-gfp接种于颅内3周后成瘤率达70%;利用B超可动态观察肿瘤生长,利用荧光体视镜可见肿瘤组织发出绿色荧光,可与周围正常组织区别。H-E染色可见肿瘤细胞核大,染色深,核分裂明显,瘤内有很多新生血管。免疫组化可见GFP阳性细胞染色深浅不一。结论:成功构建了能稳定高水平表达EGFP的大鼠神经胶质瘤C6-gfp细胞株,其生物学行为未发生改变,能在同系大鼠颅内成瘤。该模型为神经胶质瘤防治研究提供了良好的基础。; 裘玮黄倩李惠明王丰伍瑛陈霞芳易苗英; 关键词：神经胶质瘤移植瘤模型瞬时转染稳定转染绿色荧光蛋白

表达分泌型脑源性神经营养因子的腺相关病毒载体的构建及其表达的检测被引量：3: 2008年; 采用PCR和体外连接的方法构建了带有信号肽的脑源性神经营养因子(BDNF)的融合基因,将此基因插入到腺相关病毒载体穿梭质粒pSNAV,然后用重组质粒pSNAV-Ig-BDNF转染包装细胞,筛选出永久细胞株后,用携带腺相关病毒rep及cap基因的单纯疱疹病毒超感染包装细胞,成功包装出含有目的基因的一型血清型腺相关病毒。经PCR鉴定该病毒含有目的基因片段,被该病毒感染的细胞裂解液经Western blotting证实有BDNF表达,其培养液经ELISA检测证实含有高水平的BDNF蛋白。该病毒与小量的非复制型腺病毒Ad-null联合应用时,其BDNF蛋白的表达水平显著提高。可弥补腺相关病毒起效慢、对细胞转导效率低的弱点,为今后应用AAV作基因治疗提供了实验证据。; 李惠明裘玮王丰韦芳陈霞芳吴小兵黄倩; 关键词：腺相关病毒脑源性神经营养因子基因表达基因治疗

CD真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达: 2006年; 目的：构建含自杀基因胞嘧啶脱氨酶(CD)的真核表达载体pcDNA3．1／HA-myc-His(-)Z-CD,并进行哺乳动物细胞HEK293转染研究。方法：以本实验室保存的含CD基因全长的质粒为模版,用PCR方法扩增CD基因阅读框序列,并定向克隆到带有HAtag的pcDNA3．1／HA-myc-His(-)Z载体上,使目的基因与HAtag在同一阅读框。重组体质粒经EcoRI和BamHI双酶切鉴定,并对插入的CD基因片段进行测序,将鉴定好的阳性重组质粒pcDNA3．1／HA-myc-His(-)Z-CD用脂质体介导转染HEK293,提取细胞蛋白,western blot检测CD基因的表达情况。结果：阳性重组质粒pcDNA3．1／HA-myc-His(-)Z CD经EcoRI和BamHI双酶切后,获得约为5．5kb片段和1．3kb插入片段,序列分析表明插入的片段与GenBank发布的序列一致,western blot检测到CD基因的表达。结论：成功构建了含自杀基因CD的真核表达质粒。; 张巨峰韦芳李惠明黄陈于慧裘玮黄倩; 关键词：自杀基因 CD基因基因表达

人视网膜发育分化过程中基质金属蛋白酶9表达的变化: 2008年; 目的观察人视网膜发育和分化过程中基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达水平与细胞分布特点,探讨其在人视网膜发育和分化过程中的可能作用。方法胚胎发育早期、中晚期及成人视网膜石蜡切片,抗MMP-9免疫组织化学染色,观察MMP-9表达水平和分布的变化。结果胚胎发育早期的视网膜仅在外成神经细胞层的外侧可见弱阳性细胞;胚胎发育中期外成神经细胞层的外侧,即将来要发育成盘膜处出现明显的特异性染色,而其他细胞染色仍然较弱;成人视网膜的外核层出现显著的特异性染色细胞,胞质明显着色,胞体轮廓清晰,并可观察到锥体的结构以及突触的特异染色,判断这些细胞主要是光感受器细胞中的视锥细胞。结论MMP-9在视网膜中的表达与视网膜的成熟和细胞分化关系密切,在光感受器中的视锥细胞高水平表达,提示MMP-9可能参与视觉信号的处理。; 李惠明裘玮王丰马家烈易苗英王煜非黄倩; 关键词：视网膜基质金属蛋白酶9 细胞分布

新型大鼠脑胶质瘤动物模型的建立及基因治疗的实验研究: 目的：通过探讨利用腺病毒（Adenovirus，Ad）提高腺相关病毒（Adeno-associated Virus，AAV）对大脑皮层神经元转导效率的可行性、建立一种新的观察肿瘤细胞生长和迁移的胶质瘤（Glioma）原位...; 裘玮; 关键词：腺病毒腺相关病毒胶质瘤荧光素酶绿色荧光蛋白基因治疗; 文献传递

阿霉素类抗肿瘤药物与腺相关病毒的复合制剂及其用途: 本发明属于生物医药领域，涉及新的基因治疗复合制剂及其用途和使用方法。公开了在使用腺相关病毒作为基因传递载体时，联合使用一定剂量的阿霉素，可使腺相关病毒开始表达外源基因的时间明显提前，转导效率和基因表达水平明显增加，表达时...; 黄倩吴继红张圣海吴小兵董小岩裘玮刘新建陈霞芳谢匡成李惠明李川源; 文献传递

分泌睫状神经营养因子腺病毒载体的构建及小量复制病毒增强其分泌表达的研究: 2011年; 目的:探讨复制型腺病毒能否增强增殖缺陷型腺病毒Ad5-hCNTF所携带外源基因的表达分泌。方法:亚克隆获得分泌型睫状神经营养因子的基因(ciliary neurotrophic factor),然后将此基因插入到穿梭质粒pshuttle。pshuttle-hCNTF经pme1酶切后,CIAP去磷酸化,利用Ad-EASY腺病毒制备系统,将其与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共同转化大肠杆菌BJ5183,通过同源重组,筛选出含目的基因的重组型腺病毒质粒的菌株,获得大量该质粒后转染病毒包装细胞AD-293,成功包装出一种血清5型增殖缺陷型腺病毒Ad5-hCNTF。结果:经PCR鉴定该病毒含有该基因片断,Western blotting证实该病毒感染细胞后能表达CNTF蛋白。采用ELISA法检测培养液证实感染细胞能高水平地分泌CNTF。结论:体外实验表明在不同滴度的复制型腺病毒Ad5-E1+E3+的带动下,该病毒感染细胞后分泌表达目的蛋白的水平显著提高,为今后应用Ad作为基因治疗的载体提供实验证据。; 李惠明裘玮王丰韦芳张巨峰陈霞芳黄倩; 关键词：腺病毒睫状神经营养因子基因分泌表达

利用腺病毒提高腺相关病毒对肿瘤细胞的转导效率被引量：1: 2007年; 目的探讨小量腺病毒作为辅助病毒能否增强腺相关病毒(AAV)对肿瘤细胞和裸鼠肿瘤模型的转导效率并对增强的机理进行初步探讨。方法采用绿色荧光蛋白(EGFP)标记的AAV2联合不同滴度的非复制型腺病毒(Ad-null)感染人非小细胞肺癌细胞系(AAV2+Ad-null 组),并以相同剂量的 AAV2单独感染(AAV2组)作为对照。用荧光显微镜观察 EGFP 阳性细胞,流式细胞仪检测 EGFP 阳性细胞的百分率和单个细胞平均荧光强度,Western 印迹检测 EGFP 蛋白表达的变化以比较各组病毒转导效率。换用萤光素酶(Luc)标记的 AAV2,通过 Luc 检测系统检测两组对体外肿瘤细胞及裸鼠肿瘤模型的转导效率。荧光定量 PCR 检测感染后肿瘤细胞 DNA 及 mRNA 的 EGFP相对拷贝数,观察 Ad-null 对 AAV2复制及转录的影响。结果随着 Ad-null 滴度的增加,AAV2+Ad-null组的肿瘤细胞 EGFP 阳性细胞数明显增加。流式细胞仪计数的 EGFP 阳性细胞率按0.01、0.1、1、10 MOI Ad-null 滴度依次为10.9%,18.0%,36.2%,55.2%,明显高于 AAV2组(6.4%)。AAV2+10 MOI Ad-null 组单个细胞的荧光强度约为 AAV2组的1.32倍。各 AAV2+Ad-null 组 EGFP在细胞中的蛋白表达水平也均高于 AAV2组。体外、体内Luc检测均显示 Ad-null 显著增强 AAV2对肿瘤的转导效率,荧光素信号分别为 AAV2单独感染的28和4.5倍。Ad-null 可提高肿瘤细胞内AAV2的 mRNA 水平,当 Ad-null 滴度为1、10 MOI 时 AAV2+Ad-null 组的 EGFP 拷贝数明显高于AAV2组,而 Ad-null 对细胞内 AAV2的 DNA 影响不大,AAV2+Ad-null 组与 AAV2组的 EGFP 拷贝数差别不大。结论联合使用少量腺病毒可明显提高 AAV 对肿瘤细胞的转导效率,可能与其提高AAV 转录水平有关,为今后应用 AAV 作为肿瘤基因治疗的载体提供了实验证据。; 李惠明王丰韦芳董小岩王慧萍裘玮张巨峰陈霞芳吴小兵黄倩; 关键词：肿瘤基因疗法腺病毒腺相关病毒转导

不同血清型腺相关病毒在中枢神经系统转导效率研究进展被引量：1: 2006年; 腺相关病毒(AAV)能感染非分裂期的细胞,对宿主几无致病性及能使宿主长期稳定的表达外源基因,是神经系统疾病基因治疗的常用载体。不同血清型的AAV,由于分子结构与细胞结合机制的差异,在组织细胞中常表现出不同的转导效率。为了寻求更有效的中枢神经系统疾病基因治疗的方法,有必要对各型AAV在神经系统组织细胞内的转导特性进行深入的研究。; 裘玮李惠明黄倩; 关键词：腺相关病毒血清型神经系统疾病基因治疗

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