李美玉
- 作品数：11 被引量：42H指数：4
- 供职机构：大连大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程更多>>
- 海洋低温肌氨酸氧化酶生产菌株的筛选、鉴定及酶学特性研究
- 2019年
- 为获得更适应低温环境的产肌氨酸氧化酶菌株,该研究从渤海海泥中分离、筛选高产低温肌氨酸氧化酶菌株,采用形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行鉴定,并对其所产的肌氨酸氧化酶的酶学特性进行初步研究。结果表明,共分离到产肌氨酸氧化酶的菌株8株,其中菌株LYH18的肌氨酸氧化酶活力最高,为1.65 U/mL;菌株LYH18被鉴定为海泥芽孢杆菌(Bacillus oceanisediminis);肌氨酸氧化酶的最适作用温度和pH分别为25 ℃、8.0,在温度25~40 ℃、pH 7.0~10.0的范围内,酶活性较稳定,该酶属于低温酶。
- 迟乃玉刘洋于爽于爽李美玉张庆芳
- 关键词：酶学性质
- 海洋低温胆固醇氧化酶生产菌株诱变育种及酶学性质研究被引量：1
- 2019年
- 利用一株来源于海洋的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)XLH059进行紫外诱变、化学诱变及复合诱变,并对诱变菌株的遗传稳定性及胆固醇氧化酶酶学性质进行研究。结果表明,通过复合诱变育种得到酶活力最高、传代后酶活稳定的菌株XL-c23,其所产胆固醇氧化酶的最适pH值为7.0,酶活力在pH 6.0~8.0有较好的稳定性,胆固醇氧化酶最适温度为30 ℃,30 ℃以下酶活力较为稳定。
- 张庆芳希伦刘洋于爽于爽迟乃玉
- 关键词：胆固醇氧化酶蜡样芽孢杆菌诱变育种酶学性质
- 菌株LYH18发酵条件优化及肌氨酸氧化酶的分离纯化
- 2019年
- 以海洋来源的芽孢杆菌(Bacillussp.)LYH18为出发菌株,优化其发酵条件,并对其所产肌氨酸氧化酶(SOX)进行分离纯化。结果表明,其最适产酶发酵条件为肌酸添加量1.0%,酵母膏添加量0.8%,MgSO4·7H2O添加量0.05%,KH2PO4添加量0.2%,K2HPO4添加量0.05%,初始pH值为7.0,培养温度25℃,装液量40mL/100mL。在此最佳发酵条件下,肌氨酸氧化酶酶活为4.45U/mL。通过十二烷基硫酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析肌氨酸氧化酶,其纯化后的分子质量为43kDa。
- 迟乃玉刘洋于爽于爽李美玉张庆芳
- 关键词：发酵条件优化分离纯化
- 常见乳酸菌降解亚硝酸盐机理探讨被引量：16
- 2019年
- 该实验对Lactobacillus plantarum、Lactobacillus brevis、Lactobacillus rhamnosus的产酸特性、NO_2^-降解能力、16S r DNA序列及其亚硝酸盐还原酶(nitrite reductase,NiR)蛋白序列进行了研究与分析。结果表明,Lactobacillus brevis降解NO_2^-能力最强,可能是该菌有nir基因,在NO_2^-的诱导下产生NiR;该菌产酸量较低,较少的H^+和NiR降解NO_2^-生成的氨类物质,使发酵环境一直处于NiR最适作用p H值(5.0～6.0),从而使NO_2^-大量被NiR分解。Lactobacillus plantarum与Lactobacillus brevis亲缘关系较近,当环境p H值>4.5时,它主要在NiR作用下分解NO_2^-;但Lactobacillus plantarum产酸能力较强,能快速使环境p H值<4.0,从而迅速进入NO_2^-被H^+降解阶段。Lactobacillus rhamnosus与Lactobacillus brevis和Lactobacillus plantarum亲缘关系较远,没有找到nir基因,但Lactobacillus rhamnosus产酸能力较强,其降解NO_2^-机理可能主要是酸降解。
- 王一茜荣金诚王晓辉迟乃玉迟乃玉李美玉
- 关键词：LACTOBACILLUSPLANTARUMLACTOBACILLUSLACTOBACILLUS
- 几丁质结合蛋白基因克隆、表达与纯化被引量：6
- 2015年
- 该研究通过聚合酶链反应(PCR)方法从假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas sp.)DL-6菌株中成功克隆了几丁质结合蛋白基因。PCR测序结果表明,该基因全长1 596 bp,编码531个氨基酸,其理论分子质量为58.517 ku,等电点(p I)4.35,命名为CBP58(GenBank登录号KF234016)。结构域分析结果表明,该蛋白包括1个33家族碳水化合物结合模块(CBM),2个类型3几丁质结合域(Cht BDs);用Insight II 2005软件以同源建模的方法构建CBP58蛋白CBM33结构域的三维结构模型,Ramachandram图谱检测和三维结构评估显示模型结构合理,整体相容性较为可信;将CBP58基因构建到p ET23b载体,并转化至大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中诱导表达;利用镍柱亲和层析纯化获得重组蛋白。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测显示目的蛋白可溶表达,为后期几丁质结合蛋白(CBP)的生化性质表征奠定理论基础。
- 李美玉曹洪玉张庆芳王晓辉
- 关键词：克隆纯化
- 微生物亚硝酸盐还原酶的研究进展被引量：6
- 2019年
- 亚硝酸盐还原酶(Nitrite reductase,简称NiR,EC1.7.2.1)是催化亚硝酸盐(Nitrite,简称NIT)还原的一类酶,可降解NIT为NO或NH3,是自然界氮循环过程的关键酶。本文详细阐述亚硝酸盐还原酶的分类、结构特点、催化机制以及现阶段的应用领域,为深入研究亚硝酸还原酶提供参考。
- 张庆芳李美玉李美玉胡善松王晓辉迟乃玉
- 关键词：亚硝酸盐结构域
- 一种几丁质酶基因的克隆表达及酶解产物分析被引量：5
- 2016年
- 【目的】克隆耐冷菌假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.DL-6)的几丁质酶基因并进行原核表达,纯化重组蛋白并研究其酶解产物。【方法】采用PCR扩增法从Pseudoalteromonas sp.DL-6中克隆几丁质酶基因(chi A),连接到表达载体p ET28a,导入Escherichia coli BL21(DE3)进行诱导表达。SDS-PAGE检测几丁质酶Chi A的分子量与纯度,4-甲基伞形酮荧光底物4MU-(Glc NAc)2测定酶活,电喷雾质谱(ESI-MS)检测酶解产物。【结果】chi A基因(Gen Bank登录号KF234015)在大肠杆菌中高效表达,Ni-NTA亲和层析柱纯化几丁质酶Chi A的总活力可达168.68 U。ESI-MS检测结果表明重组蛋白酶解1%胶体几丁质的产物为几丁寡糖。【结论】利用内切几丁质酶Chi A水解几丁质生产几丁寡糖,为其在食品、医药和农业等领域的潜在应用提供有利参考。
- 肖景惠李美玉孙淼王晓辉
- 关键词：几丁质酶基因克隆原核表达纯化
- 海洋中产胆固醇氧化酶细菌的筛选及其发酵条件优化被引量：1
- 2019年
- 利用菌落染色法从海洋中分离、筛选高产胆固醇氧化酶的菌株,所得菌株经分子生物学技术进行鉴定,采用单因素试验对其产酶条件进行优化,并利用硫酸铵沉淀、凝胶过滤层析法对酶进行分离纯化。结果表明,以胆固醇为唯一碳源,筛选出具有高胆固醇氧化酶活性的菌株XLH059,酶活力为0.407 U/m L;菌株XLH059被鉴定为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus);菌株XLH059的最佳产酶条件为发酵周期24 h,发酵温度26℃,接种量10%,初始pH值7.0,装液量100 m L/250 m L,转速200 r/min,最佳碳源和氮源分别为葡萄糖和蛋白胨,胆固醇含量0.5%。在此优化条件下,胆固醇氧化酶活力为0.72 U/m L,是优化前的1.76倍;经分离纯化获得分子质量约为59 kDa的胆固醇氧化酶。
- 迟乃玉希伦刘洋于爽于爽张庆芳
- 关键词：胆固醇氧化酶细菌发酵条件优化分离纯化
- 海洋细菌低温葡萄糖氧化酶基因克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：4
- 2019年
- 为解决细菌葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)活力较低的问题,提取和纯化了实验室保藏海洋细菌 Citrobacters sp. 8-III的基因组DNA,并与现存GOD基因比对获得目的序列,以此序列为模板获得GOD基因。将人工合成并密码子优化的GOD基因亚克隆至载体pET28a(+),构建重组表达载体pET28a(+)-GOD并转化到 E. coli BL21(DE3)中实现表达。经镍柱亲和层析得到较纯的重组GOD,并对其进行酶学性质研究。实验成功构建了产GOD的E. coli BL21(DE3)/pET-28a(+)-GOD,目的蛋白约46 kDa。重组GOD酶活为2.04 U/mL,该酶最适作用温度为25 ℃;最适作用pH为6.0;K^+、Ni^2+对GOD的活性有明显促进作用;重组GOD添加至饲料中可加快雏鸡生长,且具备一定防腐功效。该研究首次将海洋细菌GOD基因导入大肠杆菌中,开拓GOD外源表达新的宿主。同时重组GOD具备低温酶特性,为其在饲料添加剂和低温领域应用奠定了基础。
- 刘春莹胡善松张庆芳李美玉李美玉迟乃玉
- 关键词：大肠杆菌纯化酶学性质
- 海洋低温葡萄糖氧化酶细菌选育及其酶学性质研究被引量：4
- 2019年
- 为获得产低温葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)的细菌,提高其产酶能力,研究GOD酶学性质,通过平板显色法从海泥样品中筛选低温GOD生产菌株,经形态特征、生理生化鉴定及分子生物学鉴定确定菌株分类。经诱变育种获得高产GOD菌株,并对所产GOD进行酶学性质研究。研究获得1株编号8-Ⅲ的高产低温GOD细菌,鉴定为柠檬酸杆菌属(Citrobacters sp.8-Ⅲ),产GOD酶活力为0.75U/mL。经诱变得到可稳定遗传的突变菌株8-Ⅲ-a44,产GOD酶活力为1.77U/mL,为原始菌株的2.36倍。最适pH为6.5,最适作用温度为15℃,在0~35℃有较高酶活力,为低温酶。并且添加K^+、Ni^2+对GOD活性有明显促进作用。该研究为其在海产品保鲜、饲料防腐方面的应用奠定基础。
- 刘春莹胡善松张庆芳李美玉于爽于爽
- 关键词：海洋细菌诱变育种酶学性质
